文档介绍：:..胃癌中miR-638对胃癌细胞侵袭和迁移的影响及其分子机制研究1・河南省安阳地区医院 :低剂量辐射对树突状细胞迁移能力影响及其分子机制研究,课题编号:81202151[摘要]目的:阐释胃癌屮miR-638对胃癌细胞侵袭和迁移的影响,并证明它可能是通过影响细胞骨架调节蛋白VASP的表达水平來抑制胃癌细胞侵袭和迁移的分子机制。方法:通过Westernblot检测VASP蛋白表达水平;划痕损伤修复实验检测胃癌细胞迁移能力;-miR-638的真核表达载体,转染入胃癌细胞BGC-823,过表达miR-638,通过划痕损伤修复实验检测胃癌细胞迁移能力•结果:与对照组相比,过表达VASP3’UTR使VASP蛋白水平增加(P<);过表达VASP3’UTR能促进胃癌细胞迁移(P<);与对照组相比,过表达miR-638抑制胃癌细胞的迁移(P<);结论:过表达VASP3’UTR増加VASP蛋白水平,促进胃癌细胞的迁移;过表达miR-638能抑制胃癌细胞的迁移;miR-638直接靶向VASP3’UTR抑制胃癌细胞的迁移。[关键词]胃癌;miR-638;血管扩张刺激磷蛋口;迁移;侵袭本文用芯片筛选胃癌和癌旁组织的microRNA差异表达谱1・2,发现miR-610>miR-;生物信息学软件分析发现miR-610>miR-638可以与VASPmRNA3’非翻译区不完全互补配对;本实验以miR-638为契入点,培养胃癌细胞BGC-823,利用westernblot>PCR、划痕损伤修复实验、luciferase报告基因实验等实验技术,证实外源性过表达VASP3’UTR能促进胃癌细胞侵袭转移3。:DMEM培养基;胎牛血清;胰蛋白酶;EDTA-;十二烷基磺酸钠Sigma;N,N,•亚甲双丙烯酰***Fluka;丙烯酰***Amresco;TEMEDSigma;单克隆鼠抗人VASP抗体AlexisBiochemicals;兔抗人GAPDH抗体Santacruze;HRP或AP标记的羊抗鼠IgGSantacruze;HRP或AP标记的羊抗兔IgGSantacruze;BCA蛋白浓度测定试剂盒北京普利莱公司;DAB显色试剂盒北京天根公司;其余试剂均为国产或进口分析纯。主要仪器:显微镜:XDS-1B倒置显微镜,北京顺杰欣隆有限公司;DMBRI倒置相差荧光显微镜:LEICA,Germany;BIO-1D凝胶成像系统:法国VilberLourmat公司;超声破碎仪:美国Sonics&Materials公司;凝胶成像分析系统:Syngene;PCR仪:Eppendorf;SpectraMaxM2多功能酶标仪:MolecularDevices,USA;其余仪器均为国产。胃癌细胞BGC-823:BGC-823细胞由我院保存。质粒:-miR-GW/EmGFPvector购自invitrogeno菌株:DH5