文档介绍：目录核酸组成理化性质核酸分离、纯化的原则核酸提取的基本步骤材料准备细胞裂解分离、纯化沉淀溶解DNA提取的常用方法RNA提取的常用方法核酸的保存琼脂糖凝胶电泳核酸DNARNAGenomicDNA(原核、真核、病毒)细胞器DNA(叶绿体、线粒体等)质粒DNA(细菌、放线菌等)mRNA(1%-5%)rRNA(80%-85%)tRNA(小分子RNA)(15%-20%)核酸(nucleicacid)核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作。核酸的理化性质理化性质DNA化学性质稳定,物理上易碎,粘度大RNA化学性质比DNA活泼,易受RNA酶的污染溶解性均溶于水不溶于一般有机溶剂,在70%乙醇中形成沉淀核酸分离、纯化原则1、保持核酸分子一级结构的完整性温度不要太高控制pH值范围(pH值5-9)保持一定离子强度减少物理因素对核酸的机械剪切力核酸分离、纯化原则核酸酶能消化核酸链中的磷酸二酯键,破坏核酸一级结构。所用器械和一些试剂需高温灭菌提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂2、防止核酸的生物降解DNA酶抑制剂金属离子螯合剂:DNA酶需要金属二价离子Mg2+、Ca2+的激活,常用EDTA(乙二***四乙酸)离子螯合剂,可抑制DNA酶活性。阴离于型表面活性剂SDS除对核酸酶有抑制作用外,还能使蛋白质变性,并与变性蛋白结合成带负电荷的复合物,该复合物有核酸酶抑制剂作用。RNA酶(RNAase)抑制剂DEPC(二乙基焦碳酸盐)粘性液体,很强的核酸酶抑制剂。与蛋白质中His结合使蛋白变性。使用注意:。,保存在4℃或液氮中;。1:手指头2:枪头3:水/缓冲液4:实验台面5:内源Rnase6:RNA样品7:质粒抽提8:RNA保存9:阳离子(Ca,Mg)10:、,样品材料不要反复冻融提取血液基因组DNA时,要选择有核细胞(白细胞)含病毒的液体材料DNA含量较少,提取前先富集基因组DNA的提取