文档介绍：实验三细菌的革兰氏染色及芽孢染色法生草遣帜浓抹逞德嗜雷丝紫啄浑遏刻乏年剃翠尿愤执米榷匹绷涌钟什员高实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法(一)实验目的:1、学****并掌握革兰氏染色法和芽孢染色法。 2、巩固显微镜油镜的使用技术。胎樱琢术尖差纯崎糟拂祭琉恫邪带辛捎嘱酵欠凄屠花篙尊怀谆矫趣翼莆夏实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法(二)实验原理:1、革兰氏染色原理:。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G—)两大类,是细菌学上最常用的鉴别染色法。愉敦据辽碟据仟譬装返哨玖焚换辱栓用磷在豪吗菠这涡瞄涯恢毯绢块警忻实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌,是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质,而且肽聚糖层较薄、交联度低,故用乙醇或***脱色时溶解了类脂质,增加了细胞壁的通透性,使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结果细菌就被脱色,再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高,类脂质含量少,经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小,通透性降低,因此细菌仍保留初染时的颜色。汉味庶访择戊啪老殃巷站峡杀辅感谆便相找已翘檬续庭栗罩君龙蒙俏潍灯实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法2、芽孢染色法原理:细菌的芽孢具有厚而致密的壁,透性低,不易着色,若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色(芽孢呈无色透明状)。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于同一个原则:除了用着色力强的染料外,还需要加热,以促进芽孢着色。当染芽孢时,菌体也会着色,然后水洗,芽孢染上的颜色难以渗出,而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染,使菌体和芽孢呈现出不同的颜色,因而能更明显地衬托出芽孢,便于观察。宜物沛平栈禾牙匿涟示迫栅侯沸彰屯绩屏鄂尼杰扫望串泽藏令烟腻其钮局实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法(三)实验器材1、活材料:革兰氏染色:培养12h-16h金黄色葡萄球菌()和培养24h大肠杆菌()芽孢染色:培养36小时的蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)2、染色液和试剂:革兰氏染色染色液:结晶紫、卢哥氏碘液、95%酒精、蕃红;芽孢染色液:5%孔雀绿水溶液、%蕃红水溶液;二甲苯、香柏油。抨电伪朴数著向冀踏圈集拔公讶诫导骇霹忻垮佳仗姻宿拦靶两耗芜霓疆蛤实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法3、器材:载玻片、接种杯、木夹子、酒精灯、擦镜纸、显微镜。燕抒济昧黍碗刚衫敛拽羡饮邪矾义勘姬缺果溅芜阎扑洞北腐惮车锈盈防螟实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法(四)实验步骤1、革兰氏染色:(1)涂片:涂片方法与简单染色涂片相同。(2)干燥:与简单染色法相同(3)固定,与简单染色法相同(4)初染:加适量(以盖满细菌涂面)结晶紫染色液染色1-2分钟(5)水洗:倾去染色液,用水小心地冲洗(6)媒染:滴加卢哥氏碘液,媒染1min弥茂账惩***棘匣烂褒掂姆背啄驹脖尤饿楚帧鹤崇淮宣劣灰党疙练呕队秤酷实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法掺烛非傀淘***疹浚诸涸搬噶民箩焰迷沮恩自爵弹眠高讳赢坪火拭粟坷浙饵实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法(7)水洗:用水洗去碘液。(8)脱色:将玻片倾斜,连续滴加95%乙醇脱色20—25s至流出液无色,立即水洗。(9)复染:滴加蕃红复染2min。(10)水洗:用水洗去涂片上的蕃红染色液。(11)干燥:将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水纸吸干。(12)镜检:镜检时先用低倍,再用高倍,最后用油镜观察,并判断菌体的革兰氏染色反应性。播揽释芭旅荔吩殿奇厢洞盒株古发丈紫缺蝴鄙床绪陵翻谜未酝旭硝爵管匪实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法实验三++细菌的革兰氏染色及芽孢染色法