文档介绍：逛墨爹玩导师签章:形,∥≥;、.≥≤::≥≥≮弗毛劫磊驹呵┱拢骸冢骸瘆汐晟萝等河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺研究生论文独创性声明本学位论文在导师蛑傅夹∽的指导下,由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公共和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权归河北医科大学所有。否则,承担相应的法律责任。本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了文中特别加以标注等内容之外,文中不包括其他人已经发表或撰写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。研究生签名:导师签章:
录目基因激活基质诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化的实验研究材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯综述软骨组织工程中基因转染技术的目的基因研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯研究论文前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯喝沾酰琭璴附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
基因激活基质诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化的实验研究要目的:,制作成基因激活基质的方法,探索基因激活基质对诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化的作用,为关节软骨缺损的修复提供实蚣せ罨实闹票福%的胶原和サ目蔷厶谴姿崛芤喊:壤混合均匀,倒入模具中,.℃预冷冻湃肜涠掣稍锘卸掣,在支架上加载籘..柿#俅味掣桑詈笥媒涣<猎谑温下交联∈保票赋苫蚣せ罨剩蒙璧缇岛鸵禾逯没环ḿ觳馄孔径大小和孔隙率。靖上赴姆掷肱嘌痛ù何蘧跫氯⊥盟ú喔构晒荡ζは轮荡消化小时,用含%胎牛血清的—培养基终止消化,目滤网滤过,离心,弃上清,再用培养基重悬细胞,计数,接种于培养瓶中,置于℃、饱和湿度、的培养箱中培养。小时后首次换液,以后每三天换液一次,齑锏皆ト诤鲜卑磍:谋壤状未ù以后每次待细胞生长至约%融合时进行下一次传代。蚣せ罨矢春现靖上赴逋馀嘌喝〉代脂肪干细胞作为种子细胞,与基因激活基质复合。设置实验组投哉兆锽,橛没蚣活基质支架,橛貌缓柿3煞值慕涸蔷厶侵Ъ堋O赴Ъ芨春衔置于孔板内,。⒈ズ湿度、条件下培养,每旎灰阂淮巍法检测细胞在支架上觳饣蚣せ罨实淖H拘Ч褐Ъ芙又窒赴嘌后,用荧光显微镜观察支架内部是否有绿色荧光发出。培养,取标本在管中裂解,匀浆,然后添加腡凑账得魇樘崛∽艿腞。用检中文摘要摘验依据。方法:组织约毫升,剔除血管后,充分剪碎,%的徒涸冈嫦抡的生长状况。
测籟表达。接种后第、用ḿ觳馀嘌赴Ъ芨春衔锏牡缇倒鄄旌兔庖咦橹Ъ觳猓号嘌,分别取标本用扫描电镜观察细胞的形态和生长状况,取第瓯荆免疫组织化学及生物学的相关检测。结果:,细胞呈长梭形或多角形,第炜J汲士寺⊙.%融合,传代细胞生长明显加速,天可以达到.%融合,生长活跃,并呈典型的漩涡样生长。蚣せ罨实淖H拘Ч褐Ъ芙又窒赴嘌后,荧光显微镜观察显示实验组支架内部有绿色荧光发出,这种荧光现象一直持续到对照组无。培养时,取复合物提取总肦觳釺—表达,结果显示实验组有表达,而对照组无。接种后第、,实验组在时检测水平最高,比杂斜泶铮哉兆槲蕖缇倒鄄旌兔庖咦橹Ъ觳猓褐靖上赴牖蚣せ罨矢春后,用扫描电镜观察标本,可见基因激活基质表面布满细胞,细胞呈梭形黏附于支架上,孔隙内已有部分细胞呈集落状生长。培养芎螅璧镜可见细胞形态向多角形,不规则型转化,体积增大,周围出现较多量细胞外基质。对照组细胞多呈纤维状生长,细胞数量和细胞外基质均较少。型胶原免疫组织化学检测显示:实验组基因激活基质内部细胞呈棕黄色染色,而对照组细胞染色阴性。结论:负载有畃蛘婧吮泶镄椭柿..幕蚣活基质具有良好的细胞相容性和孔隙率,可以负载脂肪干细胞生长,并可以实现对细胞的转染,使细胞表达畃鞍祝俳陨硐蛉砉窍赴化,具有较好的诱导作用,可以作为软骨组织工程支架。