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华中科技大学硕士学位论文
中文摘要
Grim-19 对结肠癌凋亡及化疗敏感性影响的研究
华中科技大学同济医学院附属同济医院
硕士研究生:王珅
导师: 胡俊波教授
背景和目的
转录信号转导子与激活子 3 ( signal transducers and activators of
transcription 3, STAT3)及其介导的信号转导通路参与调节细胞的增殖,凋亡与分
化,并介导细胞的恶性转化,体内外阻断(或抑制)某些肿瘤细胞中 STAT3 信号通路,
可诱导瘤细胞凋亡,并抑制瘤细胞生长和存活。近期发现的干扰素(Interferon, IFN)/
维甲酸(retinoid , RA) 联合应用诱导细胞凋亡相关的基因 GRIM-19(Genes
associated with Retinoid-Interferon induced Mortality 19, GRIM-19),属 STAT3
特异性抑制蛋白,本研究旨在构建携带 GRIM-19 基因的腺病毒并探讨 Grim-19 对结肠
癌凋亡及化疗敏感性影响。
方法
以 pcxn2-Grim19 重组质粒为模板, PCR 扩增 Grim19,将 Grim19 cDNA 克隆于穿梭
质粒 pAdTrack-CMV , PmeI 线性化后, 与腺病毒骨架质粒 pAdEasy-1 共转化 BJ5183
感受态细胞, 获得带有 Grim19 基因的重组腺病毒质粒 Ad-Grim19,并酶切鉴定后, 经
PacI 线性化后转染 HEK293 包装细胞, 观察细胞内绿色荧光蛋白表达情况,并进行 3
轮扩增,收获腺病毒重组病毒子。将重组腺病毒 Ad-Grim19 转染 sw480 细胞并通过流
式细胞技术检测其凋亡表现。pcxn2-GRIM19 与 pcxn2-STAT3 质粒在脂质体
lipofectamine2000 的介导下转染结肠癌细胞 sw480, 通过蛋白 Western Blot 分析
GRIM19 在 sw480 细胞中的表达情况;利用流式细胞术检测 GRIM19 对细胞凋亡的影响;
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GRIM19 与顺铂联合应用后分析 sw480 细胞凋亡表现及 bcl-xl 蛋白的表达情况。
结果
经酶切鉴定重组腺病毒 Ad-Grim19 构建成功,荧光表现表明 Ad-Grim19 在 HEK293
包装细胞中表达;重组腺病毒 pAd-Grim19 转染 sw480 细胞后使其凋亡率升高。外源性
的 GRIM19 基因转染 sw480 细胞后,GRIM19 蛋白表达增加,GRIM19 过表达促进 sw480
细胞凋亡,GRIM19 与 STAT3 共转染 sw480 细胞时 GRIM19 的促凋亡作用减弱;GRIM19
可使抗凋亡蛋白 bcl-xl 表达降低,增强顺铂诱导凋亡的作用。
结论
成功构建重组腺病毒 Ad-Grim19,Grim19 在 sw480 结肠癌细胞系中的过表达可促
进其凋亡其增强其对顺铂的化疗敏感性。
关键词 GRIM19;STAT3;重组腺病毒; 结肠癌细胞;顺铂;bcl-xl
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[Abstract]
Effects of GRIM19 on cell apoptosis and the sensitivity to
Chemotherapy in colon