文档介绍：得分:_______南京林业大学研究生课程论文2015~20016学年第二学期课程号:课程名称:论文题目:学科专业:森林保护学号:3150462姓名:王立超任课教师:黄麟二○一六年六月内容本文研究松材线虫、松墨天牛和真菌在松树中的共生关系实验材料和方法:(1)真菌小长喙霉在PDA平板上、25℃条件下培养一周,使用前在5℃条件下保存。灰葡萄孢在10mL的大麦籽粒上培养。(2)线虫强毒虫株松材线虫T-4在25℃条件下在灰葡萄孢上培养,使用前在5℃条件下保存。松材线虫悬浊液包括成虫和幼虫,悬浊液浓度为50000条/mL。(3)昆虫松墨天牛在恒定条件下培养(25℃,16h光照、8h黑暗),让其繁殖10代,第七代到第十代成虫用来在赤松小苗上产卵,收集天牛所产的卵并将其放置在湿纸巾上,在一天之内孵化的幼虫用于实验。(4)松枝2014年六月采伐两颗12年生()的赤松和两颗12年生的黑松(),分别在实验1和实验3中使用。2015年二月采伐3颗12年生的赤松用于实验2,、,2014年十月采伐一颗12年生的赤松用于实验4,。树枝截为15cm一段,在树枝的两端用石蜡密封起来,每个实验组树枝的树木特定的每组树枝之间不存在显著差异(5)(×),用刻刀在漏出的木质部中间挖一个直径6-7mm圆形刻槽用以放置松墨天牛幼虫,一份带有灰葡萄孢或则没有灰葡萄孢的面积为5×5mm的PDA培养基放置在远离树端、接近圆形刻槽的位置。、,在漏出的韧皮部接种20uL的线虫悬浊液(1000条线虫)或者是无菌纯净水。,两个伤口接种后覆盖原来的树皮,用封口膜包起来,即使不接种松墨天牛幼虫,也挖一个小刻槽,实验4中松树枝条不用接种松材线虫悬液或水,不会在树皮上形成倾斜伤口。实验一、为了确定松墨天牛幼虫和小长喙霉对松材线虫种群生长的影响,一组赤松枝条接种松材线虫、松墨天牛和小喙长霉。第二组枝条接种松材线虫、松墨天牛和PDA,第三组枝条接种松材线虫和小喙长霉,第四组枝条接种松材线虫和PDA。他们被垂直放置使线虫远离容器底部。25℃,16h光照、8h黑暗,相对湿度100%条件下常温培养,用纯净水保持湿度。接种18天后,从松枝上剥离树皮,从枝条上取幼虫和幼虫粪便,记录韧皮部和木质部上蓝变面积确定小喙长霉的繁殖情况,从纵向韧皮部上剥离四份之一到二分之一的树皮,将树皮外层剥离,收集里面树皮以获得韧皮部样品,再将里层树皮的韧皮部剪切为1-2mm大小的树皮块,使用一把15mm宽的刀片,从接种松墨天牛幼苗和松材线虫的地方包括髓取木质部样品,记录木质部样品真菌繁殖情况,粪便、韧皮部和木质部分别在25℃下使用贝尔曼漏斗法分离48-72h,计算分离线虫浓度,材料在60℃下烘5-12d,称重,线虫密度表示每克材料干重中松材线虫的数量。分别使用电子天平和游标卡尺测量幼虫体重和头壳宽度,,根据头壳宽度确定幼虫龄期:–,–,––、二龄、三龄和四龄虫。实验二、确定赤松中韧皮部、木质部和天牛幼虫蛀屑线虫密度的不同,在2015年2月26日将刚孵化的幼虫、1000条松材线虫和一份接有小长喙霉的PDA接种在10条直径相似的上述赤松枝条上,2015年3月26日分别将韧皮部、木质部和幼虫蛀屑用以分离线虫,确定线虫密度,实验三、确定松材线虫种群和小喙长霉对松墨天牛生长发育的影响,四组黑松枝条接种松材线虫、松墨天牛和小喙长霉三个物种组成的四种组合。方法和实验一方法相同,培养条件相同。每天观察松枝,记录松墨天牛羽化情况,分性别记录成虫数量,。没有松墨天牛出现的松枝在接种153-164d后分离,称量幼虫的鲜重和记录头宽、颜色、肠内排泄物的有无以及幼虫所在的位置。实验四、为确定松墨天牛幼虫对小喙长霉繁殖的影响,6个赤松枝条接种小喙长霉和松墨天牛幼虫,接种22d后,剥离松枝树皮,幼虫蛀屑和幼虫取样,测量幼虫体重和头壳宽度文章结构摘要关键词前言材料与方法真菌线虫传播媒介松树枝条接种方法实验一实验二实验三实验四数据分析结果赤松枝条中松墨天牛幼虫和小喙长霉菌对松材线虫种群的影响(实验一)松墨天牛幼虫的粪便中高密度松材线虫的再现(实验二)黑松枝条中松材线虫和小喙长霉菌对松墨天牛生长发育的影响(实验三)赤松枝条中松墨天牛幼虫对小喙长霉菌的影响(实验四)讨论参考文献设计思路实验一为研究赤松枝条中松墨