文档介绍：菠菜色素的提取和色素分离(Extractionofpigmentsfromspinachandchromagraphicisolation)::原理:色谱法叶绿素a(R=CH3)叶绿素b(R=CHO)β-胡萝卜素(R=H)叶黄素(R=OH)维生素A相对极性的大小为:叶绿素a〉叶绿素b〉叶黄素〉胡萝卜素由于甲醇的极性在它们之间,正好可以溶解叶黄素而不能溶解其他的三者,因此实际样品中只能洗脱出三个,按照洗脱剂极性从小到大的顺序出来的为胡萝卜素,叶绿素a,叶绿素b。:名称分子量性状折光率比重熔点沸点水(S)醇(S)醚(S)-∞∞∞-∞∞∞-∞∞:硅胶G中性氧化铝95%甲醇石油醚(沸程60-90℃):旋转蒸发装置柱色谱装置柱色谱中的填充物从下至上分别为脱脂棉,石英砂、氧化铝、石英砂。:,剪碎后用甲醇搅拌均匀,研磨5min,抽滤后,弃去滤液。将液体返回研钵,先用10ml3:2石油醚-甲醇,弃去滤液,后用10ml3:2的石油醚-甲醇混合溶液萃取一次,留下滤液,每次加以研磨和抽滤。转移产出液,用10ml水水洗两次,弃去水-甲醇层,余物用污水硫酸钠干燥后转移至圆底烧瓶中,旋转蒸发除去大部分石油醚,至体积为1ml左右。,抽滤后的残渣经过萃取,研磨,抽滤后体积约为20ml,水洗后分层,石油醚层在上,甲醇层在下,舍弃甲醇层,用无水硫酸钠干燥,至粉末状的无水硫酸钠可以自由滑动为止。旋转蒸馏浓缩至1ml左右(色素恰好全部溶解为最佳)。,取四块载玻片,%羧甲基纤维素钠制板后,,粘稠程度合适,经过活化后的薄板为白色固体状。(薄层板制备的好坏直接影响色谱分析的结果)℃下活化1h。展开剂:(a)石油醚-丙酮=8:2(体积比)(b)石油醚-乙酸乙酯=6:4(体积比),取下层析板,点样后,小心加入展开剂的广口瓶中,底部垫以滤纸,盖好瓶盖。待展开剂上升至规定高度时,取出层析板,在空气中晾干,用铅笔作好标记。用不同的展开剂展开。,在20×10cm的层析柱中,加入15cm高的石油醚,将20g层析用中性氧化铝从漏斗中缓慢加入,小心打开柱下活塞,保持石油醚高度不变。流下的氧化铝在柱子中堆积。必须是用装在玻璃棒上的橡皮塞轻轻的在层析柱周围敲击。柱中的层析面由下端的活塞控制,不能漫溢和干涸。打开活塞,放出溶剂直至氧化铝表面剩下1-2mm高为止,加入石英砂。将菠菜浓缩液用滴管小心的加入层析柱的顶部,加完后打开活塞让液面下降到柱面以下1mm左右,关闭活塞,加数滴石油醚,打开活塞,使液面下降,反复几次。待色素全部加入柱体后,-9:1石油醚-丙酮溶液。然后装上一个滴液漏斗。内装15ml洗脱剂。打开上下两