核酸检测篇5-RACE技术.docx

文档介绍：编号:2-5主题:RACE技术概述:近年来随着生物技术的不断发展,出现了许多克隆新基因的方法和手段,cDNA末端快速扩增技术(rapidamplificationofcDNAends,RACE)是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3'末端的有效方法,以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。目的:。。,为寻找同源基因提供了一种手段。,例如EST库相结合,具有快速,高效克隆新基因的特点。原理:RACE是采用PCR技术由已知的部分cDNA顺序来扩增出完整cDNA5’和3’末端,是一种简便而有效的方法,包括单边PCR和锚定PCR。操作步骤:1、3’RACE-PCR3’-RACE的步骤是:利用mRNA的3’末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以连有SMART寡核营酸序列通用接头引物的Oligo(dT)30MN作为锁定引物反转录合成标准第一链cDNA。然后用一个基因特异引物GSP1(genespecificprimer,GSP)作为上游引物,用一个含有部分接头序列的通用引物UPM(universalprimer,UPM)作为下游引物,以cDNA第一链为模板,进行PCR循环,把目的基因3’末端的DN***段扩增出来。2、5’RACE-PCR5‘-RACE的步骤是先利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以Oligo(dT)30MN作为锁定引物在反转录酶MMLV作用下,反转录合成标准第一链cDNA。利用该反转录酶具有的末端转移酶活性,在反