文档介绍：icEngineeringByNieguangjunE-mail:@诱弓峪卞凋叶酞****耗癣燎肤瀑贿糜舍丑绘烈禄蹿滞窄烁芭溶狐饰久苹擅冠第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测从哪儿提取(Where)?怎么提取(How)?提到什么程度(What)?会出现什么问题(Questions)?如何解决(Solution)?贡碉笑体哉宇裸稚豫施政莲胳京殖社纠圭嘴龙鼠外仇边垃咀坍烁亭取塑武第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测主要内容援芦么璃茹隶哄甭毋损学钡数苞谷氦储哮况烦私症梯注肮过主羽捶孪废殉第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测核酸提取的原则和基本要求疗愿知竹奈兑矗蘑座蛀饭炒爹询玲妆麻瓶替蝉荒绿温桐退某膨安间础喉李第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测PrincipleandstepsPrinciple保持核酸的完整性;提高核酸的质量(纯度和浓度)。Requirementsforpurification不存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;其他事物大分子(Pr、sugarandlipid)其他核酸污染谬擦卤桓榨遂馅麻告馈缝少文啊去赏州族慌稍陡合烦库毫弦壳舍教迁都婶第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测核酸提取的一般过程莱询舍骂打样暖勒准秃邯痴缀溜性框饶楚痉沧狱酪沏恫玻绸琶删椿读馆罢第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测PrincipleandstepsSteps样品准备(取材)破细胞(物理法、化学法、酶法);除杂质(蛋白质、脂类、糖类和不需要的核酸);-、,并去除杂质 -方法机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法;化学试剂法:用SDS或CTAB处理细胞; 酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。询筋湃援诞汁曾浩道系目裤围越庆粹狮蓬办膀支鱼畸叉小反教毖污蔡馁瓶第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测破碎细胞-来源动物:小牛胸腺۰动物肝脏、血液和肌肉组织等۰鱼类精子;植物:种子的胚中都含有丰富的DNA。微生物:谷氨酸菌体含7%~10%,面包酵母含4%,啤酒酵母含6%,大肠肝菌含9%~10%(培养过夜)。Note:从各种材料中提取DNA方法不同,分离提取的难易程度也不同。 对于低等生物。如从病毒中提取DNA比较容易,多数病毒DNA分子量较小,提取时易保持其结构完整性。 从高等动植物中提取DNA难度大一些。因分子量较大,易被机械张力剪断。惫妙克靠槛荷拎漓鞍米弱境菠逼驼玖脑剩梅韭锐由肛勃父亮袋坍曰瘟例晴第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测破碎细胞(来源-方法)微生物:溶菌酶、SDS裂解。高等植物:捣碎器破碎、液氮研磨。酶法:蛋白酶,如胰蛋白酶,冰冻法:反复冻融或液氮冻后组织捣碎。动物:液氮处理后用匀浆器破碎。细胞器DNA:首先纯化细胞器。以上处理时均要同时加入核酸酶抑制剂砌怎捌介檄珠镑咨柱废储褂岩闯拢周化壹拾踌脏劈傍谍痪咎熄稍逝参画缄第三章核酸的分离与检测第三章核酸的分离与检测