文档介绍：异烟肼片含量测定实验报告紫外分光光度法测定槐花中总黄酮含量的方法学验证实验日期温度相对湿度实验人员学号一、实验目的 1、掌握比色法测定槐花药材中总黄酮含量的方法及原理2、掌握方法学验证并证明采用的方法适合于相应的检测要求二、实验原理槐花药材的主要有效成分是黄酮类化合物,其中芦丁的含量最高,所以槐花药材的鉴别及含量测定均以芦丁为指标成分。黄酮类化合物在碱性条件下与铝盐发生配位反应,生成红色的配位化合物,使得最大吸收波长红移至可见光区,且具有较高的吸收系数。黄酮类与铝盐的配位反应是定量完成的,因此可采用比色法测定槐花药材中黄酮的含量,避免其他非黄酮成分对测定准确度的影响。药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求,在建立药品质量标准时,分析方法需经验证。本次实验所进行的是槐花总黄酮含量测定的方法学验证,验证内容包括线性、精密度、重现性、稳定性、准确度。三、仪器与试剂仪器:紫外-可见分光光度计,电子天平,玻璃比色皿,超声仪,25ml量瓶,100ml量瓶,150ml锥形瓶,100ml量筒,50ml烧杯,洗耳球,洗瓶(2个),胶头滴管,药匙,玻棒,移液枪,移液枪头,长颈漏斗,1ml吸量管,2ml吸量管,5ml吸量管,10ml吸量管,500ml烧杯试剂:槐花药材,芦丁对照品,5%亚硝酸钠溶液,10%硝酸铝溶液,氢氧化钠试液,甲醇,乙醇四、实验步骤 :将槐花研碎,取粗粉约1g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入60%乙醇100ml,称定重量,超声30分钟,取出冷却至室温,用60%乙醇补足失重,摇匀,过滤,取续滤液10ml,置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。 : 取芦丁对照品50mg,精密称定,置于25ml量瓶中,加甲醇适量,置水浴上微热时溶解,放冷,加甲醇至刻度,摇匀。精密量取10ml,至于100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得浓度为/ml的芦丁对照品溶液。、、、、、,分别置于6个25ml量瓶中,各加水使成,精密加5%亚硝酸钠溶液1ml,摇匀,放置6分钟,再加10%硝酸铝溶液,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液,加水稀释至刻度,摇匀,放置15分钟,不加对照溶液同法配制空白溶液,按照紫外可见分光光度法,在500nm波长处测定各溶液的吸光度,以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标注曲线并采用二元线性回归方法求出回归方程及相关系数。(判断依据r>): 精密量取,置25ml量瓶中,按照标准曲线制备项下的方法,自“加水使成”起,同法测定吸光度,由标准曲线计算出供试品溶液中芦丁的含量。槐花按干燥品计算,含总黄酮以芦丁计,槐花不得少于%,槐花米不得少于20%。 : 回归方程及相关系数: 取标准曲线的制备实验中已配置好的含有对照品溶液的样品在500nm处重复测定6次,并计算RSD%,RSD%应小于等于%。精密度试验试验次数RSD%均值吸光度重复性试验同一个人取同一批次槐花粗粉约1g六份,按照供试品溶液的制备和测定法项下操作,计算含量和RSD%,RSD%应小于等于%。重复性考察编号均值RSD% 称取量吸光度含量含量的计算: A—b 公式:A=aC+bC= a C×DC为检测液浓度、D为稀释体含量=×100% 积、W为称取量W 样品1含量= 样品2含量= 样品3含量= 样品4含量= 样品5含量= 样品6含量= 含量%平均值:RSD%: 取标准曲线的制备实验中已配置好的含有对照品溶液的样品在500nm处,分别在0、15、30、45、60、75min后进行测定,计算RSD%,RSD%应小于等于%。稳定性试验时间均值RSD%吸光度槐花样品含量测定由重复性试验的结果可得:编号称取量吸光度含量计,槐花不得少于%,槐花米不得少于20%。) 加样回收率试验标准曲线的制备按实验步骤3,重新制备标准曲线。标准曲线的绘制吸光值 1 2 样品含量测定34 5 6 均值 RSD% 标准曲线的绘制: 回归方程及相关系数: 加样回收试验精密称取已知含量的槐花粗粉约,9份,分别置于9个150ml锥形瓶中,分为高、中、低三组,按高、中、低质量浓度分别加入芦丁对照品,高浓度组加入槐花粉末所含总黄酮质量的120%;中浓度组加入槐花粉末所含总黄酮质量的100%;低浓度组加入槐花粉末所含总黄酮质量的80%,接着按供试品溶液的制备和测定法项下操作,计算数据,一般回收率应为98%—102%,RSD%应小于等于%。加样回收试验样品序号样品1样品2样品3样品4样品5样品6样品7样品8样品9 吸光度A 槐粉本底量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率(%) 平均回RSD%收率(%) 高浓度120%中浓度100