文档介绍：●制品说明1●制品内容1●保存1●试剂盒以外必备的主要试剂及仪器1●使用注意1●操作方法1●附录6●关联产品7●制品说明本制品是一种对蛋白质溶液进行高灵敏度比色定量的试剂盒,可用于含有表面活性剂蛋白质溶液的定量。BCA蛋白质定量包括两步反应,首先,二价铜离子(Cu2+)在碱性条件下被蛋白质的肽键还原成一价铜离子(Cu+),还原后的铜离子浓度与溶液中所含蛋白质浓度成正比。其次,两个分子的bicinchoninicacid(BCA)络合一个一价铜离子(Cu+),形成一种在562nm处有强吸收值的紫色复合物。本制品依此为原理,根据测定562nm处光吸收值,与标准曲线对比,获得待测蛋白的浓度定量。使用BCA法进行蛋白质定量具有以下特点:,~2mg/ml浓度范围内蛋白质浓度与吸光度值成线性关系;。但由于还原剂和螯合剂对反应有阻害性,因此本制品不适用于含有还原剂或者螯合剂的蛋白质样品的定量。详细信息见“附录”的表1。使用本制品进行样品定量时,可使用试剂盒中附带的BSAStandardSolution制备标准曲线。使用本制品时,1ml标准反应体系可进行500次反应,使用微孔板的200μl微量反应体系可进行2,500次反应。●××(2mg/ml)*1ml×10支*:BSAStandardSolution(牛血清白蛋白标准品溶液)%%NaN3溶液中。●保存BCAReagentA、BCAReagentB:室温保存BSAStandardSolution:4℃*本制品为常温运输。收货后,BSAStandardSolution请于4℃保存。●(1ml反应体系时使用)(200μl反应体系时使用)()(37℃)(60℃)(低浓度蛋白质样品测定时使用)●使用注意以下为使用本试剂盒时的注意事项,使用前请一定认真阅读。,恢复至室温或在20~50℃的水浴中复温。轻弹混匀,轻微离心后使用。,可使用去离子水、%NaCl或PBS。。使用前于20~37℃保温,轻轻振荡混合,使沉淀物完全溶解后再使用。,可选择540~570nm的滤光片进行测定,不会对蛋白定量产生影响。,用水充分冲洗比色皿后再使用。色素残留在比色皿上会影响低浓度样品的测定。●操作方法本制品共提供了五种操作流程,请根据样品情况选择相应操作流程。(定量范围:50~2,000μg/ml)【1ml反应体系】(定量范围:50~2,000μg/ml)【】-1-(定量范围:0~50μg/ml)【1ml反应体系】(定量范围:0~50μg/ml)【】(定量范围:0~200μg/ml)【】【工作液的配制】测定前,按照BCAReagentA:BCAReagentB=100:1的比例混合后配制成工作液。例如配制30ml的工作液时,,充分振荡混匀。配制后的工作液可在4℃保存三天使用。所需工作液量的计算方法如下:所需工作液总体积(ml)=[(BSA标准溶液8份或7份+检测样品数)×平行样本数(n)+1]×1个样品所需的工作液体积例)标准操作流程【1ml反应体系】检测样品数为12个、平行样(n=2)时:[(8+12)×2+1]×1ml=41ml例)标准操作流程【200μl反应体系】、检测样品数为20个、平行样(n=2)时:[(8+20)×2+1]×=)低浓度蛋白质样品测定的操作流程【1ml反应体系】、检测样品数为12个、平行样(n=2)时:[(7+12)×2+1]×=(定量范围:50~2,000μg/ml)【1ml反应体系】。BSA标准品溶液的稀释可使用去离