文档介绍：? ?在什么情况下使用直接称量法?什么情况下使用差减称量法? 。:重量g ,称取样品一份。实际称得g。 ,称取样品三份。⑴⑵⑶W初 W终W 实验二*** ,并写出本实验涉及的主要的化学反应式。 -,后除Ca2+、Mg2+等离子的次序能否颠倒?为什么? +、Mg2+、Ba2+等离子时能否用其它可溶性碳酸盐代替Na2CO3? ~4?能否用其它酸? ,为什么应将蒸发皿周边析出的固体及时拨入溶液中? ,能否用自来水溶解NaCl?为什么? ,煤气灯使用,蒸发浓缩与结晶,常压过滤、减压过滤、离心分离等有关内容。 :现象和数据: : 原料粗盐重g,获得提纯产物NaCl重g,产率产物纯度分析结论:: (1).用化学方法除去杂质时,选择除杂试剂的标准是什么? (2).加沉淀剂除杂质时,为了得到较大晶粒的沉淀,沉淀的条件是什么? (3).你认为本实验中影响提纯产物产率的主要因素是什么? 实验步骤: 一、纯化蛋白所用溶液的配制 1、提取缓冲液的配制 25mMTris 2mMEDTA() 10mM2-Me(350μL) PMSF(76μL) 用浓盐酸调溶液pH值至左右,定容到500mL的容量瓶中,冰箱内保存。 2、Q柱洗脱液的配制 25mMTris 用浓盐酸调溶液pH值至左右,定容到500mL的容量瓶中,冰箱内保存。 3、SP柱洗脱液的配制 20mMMeS 用NaOH调溶液pH值至左右,定容到500mL的容量瓶中,冰箱内保存。二、蛋白药物分离纯化 1、取1L菌体加入50ml提取缓冲液重悬菌体,并水浴内搅拌均匀,超声破碎。破碎功率为52%,时间:time,on,plause。破碎液离心,15000rpm,40min,保留上清液。 2、阴离子交换柱层析用缓冲液Q平衡Q柱,上清液加到Q柱,分别用缓冲溶液和不同浓度的NaCl缓冲液Q梯度洗脱,p-NPP活性跟踪,收集有活性的部分。先用含NaCl的缓冲液Q处理Q柱,洗脱其余杂质,再用超纯水清洗柱子,最后用缓冲液Q平衡柱子。 3、阳离子交换柱层析用缓冲液S平衡SP柱,将Q柱层析得到的粗提物加到SP柱,分别用缓冲溶液和不同浓度的NaCl缓冲液Q梯度洗脱,p-NPP活性跟踪,收集有活性的部分。先用含NaCl的缓冲液S处理SP柱,洗脱其余杂质,再用超纯水清洗柱子,最后用缓冲液S平衡柱子。三:结果鉴定: 实验一缓冲溶液的配制和性质、溶液pH值测定【实验目的】 . 学****缓冲溶液及常用等渗磷酸盐缓冲溶液的配制方法。加深对缓冲溶液性质的理解。强化吸量管的使用方法。学****使用pHS-2C型酸度计。培养环境保护意识。【预****作业】 ?? ?缓冲溶液的缓冲能力与什么因素有关?,设计时有哪些注意事项? ?是否均需要用pH计?? 【实验原理】普通溶液不具备抗酸、抗碱、抗稀释作用。缓冲溶液通常是由足够浓度的弱酸及其共轭碱、弱碱及其共轭酸或多元酸的酸式盐及其次级盐组成的,具有抵抗外加的少量强酸或强碱、或适当稀释而保持溶液pH值基本不变的作用。本实验通过将普通溶液和配制成的缓冲溶液对加入酸、碱或适当稀释前后pH数值的变化来探讨缓冲溶液的性质。根据缓冲溶液中共轭酸碱对所存在的质子转移平衡: - HB?B+H3O+ 缓冲溶液pH值的计算公式为: pH?pKa?lg [B][HB] - ?pKa?lg [共轭碱][共轭酸] ?pKa?lg缓冲比式中pKa为共轭酸解离常数的负对数。此式表明:缓冲溶液的pH值主要取决于弱酸的pKa值,其次决定于其缓冲比。需注意的是,由上述公式算得的pH值是近似的,准确的计算应该用活度而不应该用浓度。要配制准确pH值的缓冲溶液,可参考有关手册和参考书上的配方,它们的pH值是由精确的实验方法确定的。缓冲容量是衡量缓冲能力大小的尺度。缓冲容量的大小与缓冲溶液总浓度、缓冲组分的比值有关。β= [