文档介绍：实验一 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法
目的要求
3,5-二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。
3,5-二硝基水杨酸定糖法测定山芋份中的总糖度及还原糖。
721型分光光度计的原理及使用方法
实验原理
3, 5-二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范围内,还原糖的量和反应液的颜色强度呈比例关系,利用比色法可测知样品的含糖量。该方法是半微量定糖法,操作简便,快速,杂质干扰较少。
实验操作方法
一、葡萄糖标准曲线的制定
取9支大试管,分别按下表顺序加入各种试剂:
将上述各管溶液混匀后,在721分光光度计上用520纳米进行比色测定,用空白管溶液调零点。记录光吸收值。以葡萄糖浓度为横坐标,光吸收值为纵坐标绘制出标准曲线。
二、山芋粉中总糖和还原糖含量的测定
:准确称取2克山芋粉,放入100毫升烧杯内,加入85%乙醇50毫升,混匀,在50℃恒温水浴中保温30分钟,过滤,滤渣再用85%乙醇提取二次。将滤液合并,蒸去乙醇,加少量水,移入100毫升容量瓶中,用水稀释到刻度,备用。
:准确称取山芋粉1克,放入大试管中,加入10毫升6N盐酸和15毫升蒸馏水。混均,在沸水浴中加热半小时后,用碘化钾-碘溶液检查水解程度。若已水解完全,则不呈现蓝色。冷却后加入酚酞指示剂1滴,以10%氢氧化钠中和至溶液呈微红色。过滤并定容至100毫升。再精确吸取上述溶液10毫升,放人100毫升容量瓶中,稀释刻刻度,备用。
:取7支大试管,分别按下表加入各种试剂:
将各管混匀后,按制作标准曲线时同样的操作测定各管的光密度,在标准曲线上查出相应的还原糖含量,按下述公式计算出山芋粉内还原糖与总糖的百分含量。
试剂和器材
一、试剂
(1)3,5-二硝基水杨酸试剂(又称DNS试剂):
甲液:%氢氧化钠中,并稀释至69毫升,。
乙液:称取255克酒石酸钠,加到300毫升10%氢氧化钠中,再加入880毫升1%3,5-二硝基水杨酸溶液。
将甲液与乙液相混合即得黄色试剂,贮于棕色试剂瓶中。在室温下,放置7—10天以后使用。
(2)%葡萄糖标准液:准确称取100毫克分析纯的葡萄糖(预先在105℃干燥至恒重),用少量蒸馏水溶解后定容至100毫升,冰箱保存备用。
(3)6N盐酸溶液。(4)10%氢氧化钠溶液。
(5)碘化钾-碘溶液(碘试剂)。(6)酚酞指示剂。
(7)85%乙醇。
二、器材
(1)试管和试管架。(2)碱滴定管(50毫升)。
(3)铁台。(4)滴定管夹。
(5)吸量管(1毫升和2毫升)。(6)容量瓶(100毫升)。
(7)铜水浴锅。(7)玻璃漏斗和烧杯。
(9)铁三脚架。(10)量筒(10毫升、100毫升)。
(11)电热恒温水浴。(12)煤气灯。
(13)玻璃棒。(14)白瓷板。
(15)721分光光度计
思考题
?基本原理是什么?
?
?
总糖包括哪些化合物?
答:1.(1)比