文档介绍：中国农业科学
2013,46(16):3384-3391
Scientia Agricultura Sinica
doi: .0578-
南方根结线虫乳酸脱氢酶基因克隆及其沉默效应分析
梅眉
1,2
,黄永红
2,3 2
1,4
,谢丙炎
2
(1 湖南农业大学园艺园林学院,长沙 410128;2 中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京 100081;3 广东省农业科学院果树研究所/农业部南亚热带
果树生物学与遗传资源利用重点试验室,广州 510640;4 湖南第一师范学院,长沙 410205)
摘要:【目的】对南方根结线虫乳酸脱氢酶基因(mildh)进行克隆分析,并探索 mildh 沉默对南方根结线
虫(Meloidogyne incognita)病害的抑制作用。【方法】在前期研究中,利用生物信息学方法在线虫全基因组中
预测了一些线虫 RNA 干扰(RNAi)表型基因。本研究以预测的线虫 ldh 设计特异引物克隆南方根结线虫中 mildh。
对克隆到的 mildh 序列进行了特征分析后,利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术,将其导入番茄植株,并接种
南方根结线虫,研究 mildh 基因沉默对根结线虫根结数量影响。【结果】克隆到的 mildh 包含 1 个完整的编码框
序列,编码 315 个氨基酸。该基因与预测到的 mildh 核苷酸序列一致性高达 %,所编码的氨基酸一致性高达
%。构建烟草脆裂病毒(o rattle virus,TRV)介导的沉默载体 pTV-mildhi,并用该沉默载体对番茄
植株进行处理后,接种南方根结线虫。60 d 后统计发现,pTV-mildhi 处理的番茄植株上根结数分别比空载体对照
减少 %,比清水对照降低 %。【结论】mildh 基因沉默对南方根结线虫具有显著的抑制作用,也说明 mildh
可能参与根结线虫的致病性,该研究对线虫的病理学研究及线虫病害防控研究提供了新的理论基础。
关键词:根结线虫;乳酸脱氢酶;病毒介导的基因沉默; RNA 干扰
Molecular Clone and Its RNA Interference Effect Analysis of
Lactate Dehydrogenase Gene in Meloidogyne incognita
MEI Mei1,2, HUANG Yong-hong2,3, MAO Zhen-chuan2, LIU Zhi-min1,4, XIE Bing-yan2
(1College of Horticulture and Landscape, Hunan Agriculture University, Changsha 410128; 2Institute of Vegetables and Flowers,
Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081; 3Fruit Research Institute, Guangdong Academy of Agricultural
Science/Key Lab