试验双缩脲法测定蛋白质含量.ppt

文档介绍：:物质的电子结构不同,所能吸收光的波长也不同,这就构成了物质对光的选择吸收基础。根据物质对光的吸收特征和吸收强度,对物质进行定性和定量的分析方法,常用紫外—可见分光光度法。光的电磁波性质射线x射线紫外光红外光微波无线电波10-在一定的实验条件下,物质对光的吸收与物质的浓度成正比。AC增大定性分析基础定量分析基础I0I参比样品入射光I0透射光I一束单色光通过溶液介质后,光能被吸收一部分,吸收多少与溶液的浓度和厚度成正比。在一定的实验条件下,物质对光的吸收与物质的浓度成正比。Lambert—Beer定律A=εCLT(透射比)=I/I0=10-CLlg(1/T)=CLA为吸光度;ε为吸收系数;C为溶液浓度;L为溶液光程的厚度应用(1)比较吸收光谱曲线(2)比较最大吸收波长蛋白质的最大吸收波长为280nm,核酸的最大吸收波长为260nm。(3)(至少5个)按测定管同样方法处理显色,在选定的波长分别测定各管的吸光度(A),以吸光度为纵坐标,标准溶液的浓度(C)为横坐标,制作标准曲线。根据样品的A从标准曲线上查得样品含量,再计算出样品的浓度。常用方法标准系列未知样品标准曲线与样品的测定条件必须一致。待测样品的浓度必须在标准曲线范围内。 CX/AX=CS/AS,已知CS,测定AS、AX,可求得CX。 C=A/(为L=1cm,C为1mol/L时的吸光系数,也称为摩尔吸光系数。)分光光度计的使用