2009研究生分子医学实验技能实验三.ppt

文档介绍：生化与分子生物学技术中山医学院生物化学与分子生物学教研室实验五:大肠杆菌感受态的制备实验六:重组DNA的转化与抗药性筛选实验五大肠杆菌感受态的制备一、基因克隆(GENECLONE)1、概述也称为基因工程,即将外源基因和载体系统所组成的重组体在一定的受体细胞或宿主细胞内复制和表达的过程。2、基本步骤(1)分(分离目的基因):从生物体复杂的基因组中分离出所需要的DN***段,即目的基因(2)切(切割目的基因和基因载体):用限制性内切核酸酶切割目的基因和基因载体,以利于将两者连接形成重组体。(3)接(连接目的基因和基因载体):在体外将目的基因连接到能够自我复制的载体DNA分子上,形成重组DNA(重组体)。(4)转(转化至宿主细胞):将重组体引入(转化或转染)到宿主细胞(受体细胞)中,转化后的细胞进行扩增繁殖,获得大量的细胞繁殖群体。(5)筛(筛选阳性细胞克隆):从大量的细胞繁殖群体中筛选出转化成功(带有重组体)的阳性细胞克隆。(6)表(表达目的蛋白质):重组体在宿主细胞中表达目的蛋白质。基因工程二、感受态细胞的制备及重组体转化重组体转入受体菌受体细胞转化(transformation)转染(transfection)感染(infection)转化方法CaCl2诱导转化电穿孔PEG介导转化人工体外包装特殊处理受体细胞细胞膜特性改变