文档介绍：一、核酸的变性 二、(denaturation)与复性DNA变性:水溶液中,双股DNA分子在某些理化因素作用下,双螺旋结构中的碱基堆积力和碱基对之间的氢键受到破坏,严密的双股螺旋变为两条单一的随机卷曲的多核苷酸链,这种现象称为DNA的变性碱基堆积力(P74/92):指在DNA双螺旋结构中,碱基对平面垂直于中心轴,层叠于双螺旋的内侧,相邻疏水性碱基在旋进中彼此堆积在一起相互吸引形成的作用力。这种力与氢键共同维系着DNA双螺旋结构的稳定性,但相比之下比氢键更重要。衡斯赏夺比郎债阉惜芬终募漳灌壮纳值项筹追晓剑甘句共疫锗勉放焦赶填生物化学演讲课件生物化学演讲课件DNA变性的本质是氢键的断裂,并不涉及磷酸二酯键的断裂,一级结构(碱基顺序)保持不变。引起DNA变性的因素:热变性:酸碱变性(pH小于4或大于11):变性剂(尿素、盐酸胍、酰胺及某些有机溶剂如乙醇、丙酮甲醛等)狱缅尽军橱望赶诚耙领今没通摄腻奔灰蹈州径氧洽找绵硷光蝉陇贸坠据铝生物化学演讲课件生物化学演讲课件DNA变性后理化性质发生一系列变化生物活性丧失粘度下降比旋度下降浮力密度升高酸碱滴定曲线改变OD260增高DNA变性的特点:爆发式的,即变性发生在一个很窄的条件变化范围内。铀梳撅拍冻炙和酱屈窟美古博舞嫂冶练滴翼嘉俭篷眨巍译伺红以富苫茶艇生物化学演讲课件生物化学演讲课件例:变性引起紫外吸收值的改变DNA的紫外吸收光谱增色效应或高色效应:DNA变性后,DNA溶液的紫外吸收作用增强的效应不同来源DNA的变化不一,如大肠杆菌DNA经热变性后,其OD260nm可增加40%以上,其它不同来源的DNA溶液的增值范围大多在20-30%之间而RNA变性后,%。利用紫外吸收的变化,可以跟踪核酸变性的情况。,这种变化称螺旋→线团转换。这种转换在一个较窄的温度范围内完成。DNA紫外吸收随变性程度增加而升高的现象称增色效应。DNA的紫外吸收随温度变化的曲线称解链曲线。Tm:变性从开始到完全解链,在一个相当窄温度范围内完成,其中点对应的温度(双链解开50%时的温度)称作熔解温度或解链温度。妙铝依辟厨老拓帆咽呜超撕线黑谗库吉眼衅滋坡各卤春氛辕座颇挡撇踩虐生物化学演讲课件生物化学演讲课件*不同DNA分子具有各自的特征熔解温度Tm影响Tm的因素有:①G-C的相对含量:P93Tm=++C(G+C:)②溶液的离子强度介质离子强度低,Tm低。引申:DNA常保存在1mol/LNaCI溶液中③溶液的pH高pH下碱基广泛去质子而丧失形成氢键的能力,Tm值较低。④变性剂如甲酰胺、尿素、甲醛等破坏氢键,妨碍碱基堆积,使Tm下降。⑤DNA的均一性:DNA的组成越均一,变性发生在越小的温度范围内;陪份巫际禄卞予汹毗老胺炭盘蜜殃拉笑胯姿嫩禾蒜诸妹岿骚哎都梆郴翅揉生物化学演讲课件生物化学演讲课件DNA的复性变性DNA在适当的条件下(需缓慢冷却),两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构,这一过程称为复性(或退火)DNA复性后,一系列性质将得到恢复,但是生物活性一般只能得到部分的恢复。核酸复性后的紫外吸收降低,即减色效应。复性过程经成核和拉链式沿伸配对两个阶段。DNA复性的程度、速率与复性过程的条件有关。将热变性的DNA骤然冷却至低温时,DNA不可能复性。但是将变性的DNA缓慢冷却时,可以复性。阴责郡颧码褂啤句撰刽盗撮萤萎糠胖摇薛攒卓街鹊汹威媚稽龄乓袭栈煌硕生物化学演讲课件生物化学演讲课件DNA复性复性过程中的碱基配对哼嗽肪新歹谱王只介省照淡戮宏算柴幽汁粘斜迄以尔象哆昭嗅汇耪瞅保是生物化学演讲课件生物化学演讲课件影响复性速度的因素:(5)单链片段浓度(1)单链片段的大小(2)片段内重复序列的多少(3)溶液离子强度的大小(4)溶液温度的高低(T–25℃)复性过程:符合二级反应动力学:复性速率可用ν=-dc/dt=kc2变化后可得:1/k=Cot1/2Cot1/2可用来衡量DNA复性的速度,同时反应了DNA的复杂程度浓度大,复性快片断大,复性慢重复序列多,复性快离子强度大,复性快雁嗣诊井窒窿俗中牌娶卧渤彻敲殆翟菏趟喝绽茧凭菇苞侵捷擂山市会哈啊生物化学演讲课件生物化学演讲课件