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第卷第期重庆工学院学报自然科学年月
. . .
基因的扩增、纯化和酶切鉴定
胡仁建,谢兰香,吴彦含,张文峥,董泉,孙思
重庆工学院化学与生物工程学院,重庆
一
摘要:用重组技术获取人乳头瘤病毒型晚期基因『以提取的宫颈癌细胞株
细胞总为模板,设计一对『基因特异引物,用方法扩增重组基因,用柱层析
,用层
析技术纯化重组基因,还能通过酶切鉴定产物全长基因,为感染的
检测诊断和宫颈癌疫苗的制备奠定基础。
关键词:人乳头瘤病毒型;基因;;
中图分类号: 文献标识码: 文章编号:———慈
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高危型人乳头瘤病毒, 基因主要包括早期编码区、晚期编码区和非
珊,,而
、鲍温病蛋白结构比较保守,在其端含较多抗原表位,是
、流行病病毒的主要衣壳蛋白和重要抗原,能刺激机
学和实验室资料证实的检出率约%. 体产生保护性抗体,避免机体再受同型别
收稿日期:——
基金项目:重庆市教委科学研究项目.
作者简介:胡仁建~ ,女,重庆人,实验师,主要从事微生物与生化药学研究
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重庆工学院学报
,所以对..
基因的扩增及纯化在研制感染的高特作说明进行回收纯化产物,回
异性诊断试剂、早期方便地预警相关宫颈癌的发收产物作%琼脂糖核酸电泳.
生,以及疫苗的研制奠定了物质基础. ..
全基因中有工,工酶切位点,用
材料与方法这个酶酶切产物可分析
%琼脂
. 材料与标本
糖核酸电泳.
宫颈癌细胞株购于由北京肿瘤防治研
究所,购于公司,购于华南理工大
结果
学,细胞或组织小量抽提试剂盒、胶回收小
量试剂盒次均购于上海华舜生物技术有限. 提取的宫颈癌细胞株
公司,,/支聚合酶, 作%琼脂糖核酸电泳,显示出一条碱基数目
,,工,等酶购于上海生工生物很大的条带,如图所示.
工程技术服务有限公司.
. 方法
..
或组织小量抽提试剂盒说明书的操作步骤完
成,作%琼脂糖核酸电泳.
.。,
基因全长—,为了方
便克隆、高效表达和纯化蛋白,本研究自
行设计一对引物,并在引物的’末端和’末端分.;~.细胞总
别引入了工和Ⅲ酶切位点,在引物的’图细胞总
末端引入×—,以便用镍柱亲和层析纯化
.扩增产物
:一:’一—
以提取的宫颈癌细胞株总为模
一’,带下划线的是
板,加入特异引物,扩增出目的基因,
酶切位点; 一:’一
作.%的琼脂糖凝胶电泳,显示一条清晰的条带
一’,带下划线的是Ⅲ酶
在左右,与预计的片