文档介绍：摘要牛传染性鼻气管炎(Infectiousbovinerhinotracheitis,IBR)是一种牛的具有潜伏感染和持久感染特点,并能引起牛多系统感染的急性接触性传染病。本试验从牛外周血分离培养单核巨噬细胞,并对其进行形态学观察和流式细胞术鉴定;应用绝对荧光定量PCR方法检测牛传染性鼻气管炎病毒(Infectiousbovinerhinotracheitisvirus,IBRV)在单核巨噬细胞内的增殖规律;通过相对荧光定量PCR方法对牛单核巨噬细胞体外感染IBRV后,0、6、12、24及48h时表达IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-ɑ等细胞因子mRNA转录水平进行分析。试验结果如下:(1)通过密度梯度法分离培养的贴壁细胞,经过形态学观察和流式细胞术鉴定,确认为单核巨噬细胞。(2)IBRV感染体外培养的单核巨噬细胞后,在前6h增殖最快,之后增殖相对比较缓慢,在96h达到峰值,之后随着时间的增加,IBRV在巨噬细胞中的含量开始降低。(3)IBRV感染体外培养的单核巨噬细胞后,可以显著降低IL-4、IL-6和IL-8的mRNA转录水平(P<)。(4)IBRV感染体外培养的单核巨噬细胞后,可以显著升高IL-10及TNF-ɑ的mRNA转录水平(P<)。本试验通过检测IBRV感染单核巨噬细胞后,IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-ɑ等细胞因子表达水平的动态变化,分析IBRV对牛单核巨噬细胞免疫学功能的影响,为进一步研究IBRV致病机理提供依据。关键词:IBRV;单核巨噬细胞;流式细胞术;细胞因子TheEffectsofIBRVonExpressionofCytokineofBovineMonocyte-MacrophageAbstractInfectiousbovinerhinotracheitis(IBR)(PCR);ThetranscriptionallevelofIL4,IL-6,IL-8,IL-10andTNF-ɑ,wereanalyzedbyrelativefluorescencequantitativepolymerasechainreaction(PCR)afterbovinemononuclearmacrophagebeinginfectedwithIBRV0,6,12,:(1)Theculturedadherecellsseparatedbydensitygradientseparationmethodwereidentifiedasmononuclearmacrophagesbymorphologicalobservationandflowcytometry.(2)After6hwhichIBRVinfectedmononuclearmacrophages,IBRVgrewfastestandthenthegrewingspeedwasincrementisrelativelyslowandat96hitreachedapeakvalue,withthetimegoingby,theconcentofIBRVbegantodecreaseinmacrophages.(3)TheinfectionofIBRVwithmononuclearmacrophagescansignificantlydecreasemRNAexpressionlevelofIL-4、IL-6andIL-8.(p<)(4)TheinfectionofIBRVwithmononuclearmacrophagescansignificantlyincreasemRNAexpressionlevelofIL-10andTNF-ɑ.(p<)hangesofcytokinesexpressionlevel,suchasIL4,IL-6,IL-8,IL