文档介绍：:..|成绩: |曰期:2015年12月18曰南京林业大学实验报告专业学号_姓名_实验二、无菌操作技术一、实验目的:1、了解并掌握植物材料的准备、消毒。2、培养基配制及器皿高温灭菌。3、无菌操作及接种的原理和技术。二、实验原理植物组织培养必须在无菌环境中进行,因此外植体、器皿及作为外植体生长介质的培养基的灭菌操作非常重要,一旦污染,就会造成组织培养的失败。野外植物材料都奋各种菌类,进行离体培养前需经过表面消毒火菌;培养基封装封U后应立即火菌,至少应在24小时内完成灭菌程序。三、材料与仪器1、材料:喜树带芽茎段2、仪器设备:高压火菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。U!实验步骤1) 培养基的消毒将分装好的培养基放入消毒灭菌锅灭菌,灭菌20分钟左右,灭菌后从火菌锅中取出培养基,平放在实验台上令其冷却凝固。2) 高压蒸汽灭菌锅的使用方法(1)高压锅放水至平把架;(2)把包扎好的培养基装入高压锅;(3)盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀;(4)然后接通电源;(5),打开放气阀,排除冷空气(此步很重要);(6)排除冷空气后,关闭放气阀,,开始计算火菌吋间,具体方法:,关闭电源,,不断重复此操作过程,维持20分钟;(7)灭菌时间达到20分钟后,除去电源,打开放气阀(注意要逐渐放气)待高压锅内的空气完全排除后,打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍待冷后再把培养基取出;(8)经过灭菌的营养培养基不宜放置太长,应尽早使用,但为了在使用前能检查培养基有无微生物污染,可将培养基置于25°C下保存4天,如果培养基需要贮存较长时间,可在4°C低温下保存。3) 植物材料表面清理材料一一流水冲洗一一加入吐温(或洗衣粉)清洗一一自来水冲洗4) 喜树外植体的接种1、准备打开超净工作台,将镊子洒精灯放如超净工作台中,用紫外灯照20min后关闭紫外灯,同时将豌豆种子用自来水冲20min关闭紫外灯后在台上点燃2个酒精灯,用棉球将镊子烧