植物钙调磷酸酶(CaN)试剂盒使用说明书.doc

文档介绍：植物钙调磷酸酶(CaN)试剂盒使用说明书目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中钙调磷酸酶(CaN)含量。实验原理:植物钙调磷酸酶试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物钙调磷酸酶(CaN)水平。用纯化的植物钙调磷酸酶(CaN)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入钙调磷酸酶(CaN)抗原,再与HRP标记的钙调磷酸酶(CaN)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的钙调磷酸酶(CaN)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物钙调磷酸酶(CaN)抗原浓度。试剂盒内容及其配制:试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)塑料膜板盖1块半块标准品:400u/l 1瓶()1瓶()空白对照1瓶()1瓶()标准品稀释缓冲液1瓶()1瓶()生物素标记的抗BALP抗体1瓶()1瓶()亲和链酶素-HRP1瓶(12l)1瓶(5l)洗涤缓冲液1瓶(20l)1瓶(10l)底物A1瓶()1瓶()底物B1瓶()1瓶()终止液1瓶()1瓶() 自备材料:。:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。。样品收集、处理及保存方法: 1、血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。2、血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。5、保存……如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 植物钙调磷酸酶试剂盒操作注意事项: ●试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。●实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。●不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。●使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。●使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。●底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。●加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。●按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。植物钙调磷酸酶试剂盒操作步骤: ,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用