文档介绍：冰冻切片的制备
                                      
一、冰冻切片技术的概述
(一)优点:
,可以不需要对组织固定、脱水、透明、包埋等手续即可进行切片,减少了一些中间环节。
,用时短。
。
,类脂等成分。
,特别是对于那些对有机溶剂或热的温度耐受能力较差的细胞膜表面抗原和水解酶保存较好。
(二)缺点:
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,组织过大不容易冻结或者组织冻结不均,影响切片及染色效果。
。
,并且组织结构也不如石蜡切片清晰。
(三)主要应用于:
。
。
。
二、冰冻切片机的使用及注意事项
(1)新鲜的组织制备
组织尽可能新鲜、骤冷愈快愈好,才能避免冰晶,常用的骤冷剂有:① CO2气(-78℃) ②***干冰冷却的轻石油醚、乙烷和庚烷(-80℃) ③液氮(-190℃)④液氮冷却的丙烷(-19℃)。液氮适用于组织化学,较安全。缺点:组织块易发生龟裂。
(2)固定组织的制备
为防止水解酶和其他物质的移位、弥散,常用4℃、24小时的甲醛固定能很好地保存酶类。但对许多脱氢酶和转移酶能灭活。故不宜使用,低温,冷甲醛短时间固定(10分钟左右)固定,可显示琥珀酸脱氢酶。
电镜出现后,需要保存细胞的超微结构,以4%缓冲戊二醛(25%戊二醛16ml;(pH7.)84ml;蔗糖8g)固定较好。这些固定液主要用于水解酶,而不适于许多氧化还原酶和转移酶。
(3)恒冷箱温度
一般在冷冻后10分钟,到接近冷室温度时再切,一般组织在-15~-20℃切片最易成功。每种组织有其合适的切片温度、刀的温度和冷室温度,Pearse及Bancroft的经验如下:
组织刀温度组织温度恒冷箱温度
肝-18 -10 -5
肾-15 -8 -5
皮肤-35 -10 -5
脑-18 -5 -5
固定组织一般高3-5度
(4)抗卷板
抗卷板的前缘与刀面须有足够的距离,使切片平滑通过。抗卷板略高于刀面的最高点。可凭经验调整刀对组织的角度,一般新刀为20゜
(5)切片机
操作程序:先接通电源,