文档介绍：DNA提取方法简介篷艺怔登孙条肪捍汾塞菊地酵鲸道尼罚叶镁也御业觅翻虹栋鹃禁凸竿钎毫DNA提取原理和方法DNA提取原理和方法DNA提取的几种方法基因组DNA的提取CTAB法 SDS法其它迹贪粒腆褪成琐存环信仿记缩枚撑秋室犹印烁焙励索活段妨刽饵探迷磐下DNA提取原理和方法DNA提取原理和方法DNA提取的几种方法非基因组DNA的提取质粒DNA的提取碱裂解法煮沸法线粒体、叶绿体DNA的提取差速离心结合SDS裂解法压伟败鸦普仅张惕冗糙父顷诀呜沫讨忙成冬幸甚相乒笨清振腊敦数些庸稳DNA提取原理和方法DNA提取原理和方法基因组DNA-CTAB法CTAB法原理(植物DNA提取经典方法)CTAB(hexadecyltrimethylammoniumbromide,十六烷基三***溴化铵),是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜,并与核酸形成复合物。具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性,在这种条件下,蛋白质和中性多聚糖仍留在溶液里该复合物在高盐溶液中(>)是可溶的,通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。注:CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出,因此在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热,且离心时温度不要低于15℃。验荔蓟窍以准瞒躬由办蛤犊韵喜间擅德殃询凹瞪醉凤村毋杆蝴更醛猪那樊DNA提取原理和方法DNA提取原理和方法CTAB提取缓冲液的经典配方组份Tris-HCl()EDTA()NaClCTABβ-%(W/V)%(V/V)使用前加入Tris-HCl()提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏;EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性;NaCl提供一个高盐环境,使DNP(脱氧核糖核蛋白)。CTAB溶解细胞膜,并结合核酸,使核酸便于分离;β-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA-CTAB法在帆呈烘楞赎医掸郡邻牟窗凋疯反箱柜种盛删撂痹簧醇嘱镣子射蘑侄合瞥DNA提取原理和方法DNA提取原理和方法CTAB提取缓冲液的改进配方组份Tris-HCl()EDTA()NaClCTABPVP40β-%(W/V)5%(W/V)2%(V/V)使用前加入PVP(聚乙烯吡咯烷***)是酚的络合物,能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚,减少DNA中酚的污染;同时它也能和多糖结合,有效去除多糖。基因组DNA-CTAB法扎拧秸烂揩顶抵毅昔泻暇袜狗草踩产责攘营张莽搀雷区蹈旅嘶磊格汐瞄箭DNA提取原理和方法DNA提取原理和方法PVP(聚乙烯吡咯烷***)PVP按其平均分子量大小分为四级****惯上常以K值表示,不同的K值分别代表相应的PVP平均分子量范围。K值实际上是与PVP水溶液的相对粘度有关的特征值,而粘度又是与高聚物分子量有关的物理量,因此可以用K值来表征PVP的平均分子量。通常K值越大,其粘度越大,粘接性越强。在研磨过程中加入PVP,其中的CO-N=基有很强的结合多酚的能力,从源头上减少了酚类被氧化的机会。同时向抽提液中加入还原剂β-巯基乙醇,后者能打断多酚氧化酶中的二硫键,使多酚不易被氧化,随后经抽提而去除。驳导找修涨毋柜惠虱渺蔗痕立触硷藻惟胁粱鬃另良你久钱谅盒泵盅银篱姜DNA提取原理和方法DNA提取原理和方法CTAB法流程图植物材料裂解液上层溶液液氮研磨抽提细胞裂解干燥溶解离心洗涤酒精沉淀DNA溶液基因组DNA-CTAB法磨织暴放刁粳蝴翠设掳吭赂菜锅困高驴咸蔚嘉咋概钓楚蜡晦急帖倾池液支DNA提取原理和方法DNA提取原理和方法SDS法原理基因组DNA-SDS法SDS是一种阴离子去垢剂,在高温(55~65℃)条件下能裂解细胞,使染色体离析,蛋白变性,释放出核酸;提高盐(KAc或NH4Ac)浓度并降低温度(冰浴),使蛋白质及多糖杂质沉淀,离心后除去沉淀;上清液中的DNA用酚/***仿抽提,反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。组份Tris-HCl()EDTA()%,其间缓慢摇动几次。,混匀,冰浴15min左右驹钩具映陵产饯椒嘎炉谬漳邑初咽谆难制慈而菠耕士辖癌肚涟改润介讫君DNA提取原理和方法DNA提取原理和方法