文档介绍：Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;mercialuse袂湖南科技学院实验报告莀芈学生姓名李诗学号201107004215肂专业生物技术年级、班级1102蚁课程名称细胞生物学实验实验指导老师蒋琼凤、沈玉平莀蚈细胞中过氧化物酶的显示螄细胞凋亡的形态学检测与观察蚃一、实验目的:蒀掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。螅了解细胞凋亡的生物学意义蒆掌握凋亡细胞的形态学检测方法蒂二、实验原理:,用联苯胺处理标本,细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝,进而变为棕色产物,因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。中间产物蓝色联苯胺是不稳定的,无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。,遵循自身的程序,自己结束其生命的过程。它是一个主动的、高度有序的,基因控制的,一系列酶羄参与的过程。:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。虿三、实验步骤:薇细胞中过氧化物酶的显示蚆1、在载片上滴一滴PBS缓冲液;羀2、取骨髓细胞:用断颈法处死小鼠,立即剪取后肢,去除肌肉,剥出后肢股骨,剪开股骨一端,用牙签尖的一端插入剪开的小孔中,抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上;蝿3、涂片:用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开,室温晾干;羈4、媒染:%硫酸铜液,以盖满涂片为宜,处理30秒-1分钟。膄5、倾去硫酸铜液,直接滴入联苯胺混合液反应6分钟(以盖满涂片为宜)肃6、清水冲洗,番红复染2min。衿7、镜检:清水冲洗,室温晾干,先低倍镜下观察,后换高倍镜下观察(油镜100×)膅细胞凋亡的形态学检测与观察袆吉姆萨染色:袂1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)罿2、生理盐水轻轻漂洗细胞薆3、95%乙醇固定5min芄4、PBS缓冲液洗2次薁5、吉姆萨染色液染色5min罿6、蒸馏水轻轻洗去染液羇7、普通光学显微镜下观察。肅吖啶橙染色:蚄1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)聿2、生理盐水轻轻漂洗细胞莇3、甲醇:冰醋酸(3:1)固定5min蒃4、PBS缓冲液洗2次每次1min莂5、%吖啶橙染色液在避光环境下染色5min腿6、蒸馏水轻轻洗去染液螈6、选用蓝光激发滤片在荧光显微镜下观察。膅四、结果与分析:膁1、根据随机选择的几个视野的统计,该样品的细胞凋亡率=227/506×100﹪=﹪艿袅Hela细胞凋亡过程中核染色质蚃的形态变化(吖啶橙染色)羀五、思考题:莈1、细胞凋亡的调控机制芆细胞凋亡是一个受基因调控、众多细胞膜受体和胞浆蛋白参与的细胞主动自杀过程,其触发因素多种多样,包括细胞内诱导因子和抑制因子对细胞凋亡的调控。莅2、细胞凋亡的特征羃凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细