文档介绍：自己收藏的觉得很有用故上传到百度与大家一起分享!免疫组化操作步骤(一)、(二)、(―):NaC137mmol/,,.(CB,,1000ml):柠檬酸三钠3g,():&8226;2H2O,用10mmol/,():,:%胰蛋白酶:%CaCl12()%胃蛋白酶液:%甲醇―H2O2溶液:用30%H2O2和80%:(-)等量混合b油和TBS(PBS)-,适用于荧光纤维镜标本;-(三)、操作流程1、脱蜡和水化:脱蜡前应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟a组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟,更换二甲苯后在浸泡10分钟b无水乙醇中浸泡五分钟c95%乙醇中浸泡五分钟d75%乙醇中浸泡五分钟2、抗原修复:用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片:A抗原热修复a高压热修复在沸水中加入EDTA()().()至95℃左右放入组织芯片加热10-()至沸腾后将组织芯片放入断电间隔5-10分钟反复1-2次适用的抗原:Bcl--------%%胃蛋白酶液胰蛋白酶使用前预热37℃消化时间约为5-30分钟适用于被固定遮蔽的抗原:-erB-、免疫组化染色SP法(1)脱蜡、水化(2)PBS洗2-3次各5分钟(3)3%H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上室温静置10分钟(4)PBS洗2-3次各5分钟(5)抗原修复(6)PBS洗2-3次各5分钟(7)滴加正常山羊血清封闭液室温20分钟甩去多余液体(8)滴加Ι抗50μl,室温静置1小时或4℃过夜或37℃1小时(9)4℃过夜后需在37℃复温45分钟(10)PBS洗3次每次2分钟(11)滴加Ⅱ抗45-50μl,室温静置或37℃1小时(12)Ⅱ%的tween-20.(13)PBS洗3次各5分钟(14)DAB显色5-10分钟在显微镜下掌握染色程度(15)PBS或自来水冲洗10分钟(16)苏木精复染2分钟盐酸酒精分化(17)自来水冲洗10-15分钟(18)脱水、透明、封片、镜检4、SABC法(1)脱蜡、水化(2)PBS洗2次各5分钟(3)用蒸馏水或PBS配制新鲜的3%H2O2室温封闭5-10分钟用蒸馏水洗3次(4)抗原修复(5)PBS洗5分钟(6)滴加正常山羊血清封闭液室温20分钟甩去多余液体(7)滴加Ι抗50μl,室温静置1小时或4℃过夜或37℃1小时(8)PBS洗3次各2分钟(9)滴加生物素化Ⅱ抗20℃-37℃20分钟(10)PBS洗3次各2分钟(11)滴加试剂SABC20℃-30℃20分钟(12)PBS洗4次各5分钟(13)DAB显色:试剂盒或自配显色剂显色(14)脱水、透明、封片、镜检免疫组化问题解答 1、染色过强原因解决方法a抗体浓度过高或孵育时间过长降低抗体滴度、抗体孵育时间:室温1小时或4度过夜b孵育温度过高超过37度一般在室温20-28度cDAB显色时间过长或浓度过高显色时间不超过5-12分钟以显微镜下观察为准2、非特异性背景染色原因解决方法a操作过程中冲洗不充分每步冲洗3次每次5分钟b组织中含过氧化物酶未阻断可再