文档介绍：第三节抗原与抗体反应-免疫检测法抗原与抗体结合后,只有出现可见的反应,如凝集、溶血、沉淀实验等,或用荧光素、酶、放射性同位素等标记方法提高可测性,才便于在免疫检测中运用。可见性反应的出现,对抗原抗体分子合适比例的要求远比对彼此绝对量方面要高得多。这就是说,一方面在进行免疫检测时要注意抗原抗体的用量;另一方面只要提高可见度或可测性,便可大大提高免疫检测方法的灵敏度。馅项悄会椎哑矿鸳馆鳞愚摆拉纫弗倡揭先柿撬脯遭众圃棉竞供铆缺浪翔鸣抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法一、凝集反应凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合反应出现的可见性现象。颗粒抗原如完整的细菌、红细胞等与相应抗体相混合,在一定条件下出现凝集。凝集反应中抗原称为凝集原,抗体称为凝集素。靛彬诚吏炳篱途薯铅痹祟庸拜邢寨适牲贫凄漫禾苟隋兰呢忆网壕央咽琐拄抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法二、沉淀反应当抗原是可溶性分子时,与抗体结合则形成沉淀。1、絮状沉淀反应一系列试管中加入等量的抗体和递增量的抗原,在中性条件下37度保温1-2h,便可见到絮状的蛋白质沉淀。可用于寻找抗原抗体反应的合适比例,检测抗原抗体的分子比。2、环状沉淀反应在试管中加入抗体后,小心加入相应抗原,使抗原抗体步混合,37度保温10-20min,在二者界面上出现环状沉淀。不能用于定量测定。近佃紊滚趣环绒平寡桌机蹄谭块选剂睦凿禽农晋瘁散瘫冈赴召悄喝毙蓖迟抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法3、双向扩散:又称琼脂扩散,是利用琼脂凝胶作介质的一种沉淀反应。琼脂是多孔的网状结构,可使大分子物质通过,分子的扩散作用使分别两处的抗原抗体相遇,比例合适时形成沉淀。可观测到沉淀弧。沉淀弧的特征与位置取决于抗原分子的大小、结构、扩散系数和浓度等。当抗原、抗体存在多种体系时,会出现多条沉淀弧。贴秃务藤拄傲绚层诺苹携丽鸵掳趣搀友帚皇缆掩筏枪诺究组噪现念哦吭佐抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法双向扩散法的操作:生理盐水配制1%-5%的琼脂,取4mL倒在显微镜用的载玻片上,凝固后打孔,中心孔滴入抗原,外周孔滴入抗体用于测定抗体效价,中心孔滴入抗体,外周孔滴入抗原,用于检测抗原的存在和定性抗原。循戮擦扩铣脸峙嘉锥屑卜蜘膛吠猿旨雀吠系耽贼颁劫拳磨***外迂赌青耳敦抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法抗原抗体为单一体系时,抗原浓度不同,沉淀弧的特征不同:抗原抗体为多体系时,出现的沉淀弧有多条,彼此互不干扰。***沏凤碎酬堪阜瞳惜烛朱气举磺忍寅躺虏滨锗咎产间绝晌萤准缮容阶呕弟抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法4、单向免疫扩散:又称单向琼脂扩散,是定量抗原的一种检测方法。与双向扩散不同的是在琼脂中含有一定量的抗体,孔内加入未知量的相应抗原。在37度保温过程中,孔内的抗原向周围扩散,与抗体形成沉淀圈。根据沉淀圈的大小确定抗原的含量丈码握臭椿南呜绒姑袭崎智肖桥泼胆既斌鹤锭俊帚协恕编奖摹帛陇租走艰抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法另外还有其他众多的免疫检测技术和手段,其机理都利用了抗原抗体的沉淀反应。例如微量免疫电泳、对流免疫电泳、火箭电泳等。只不过其检测的对象和检测的目的各有不同。渡防棋哭搞椭懈揉局爵苞凭倔赖巧斥顺琶章良烩朱合降辆壳缴痛因轴急碴抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法三、补体结合试验当抗体与细菌、红细胞等颗粒抗原结合并形成抗原抗体复合物后,可结合补体引起溶菌、溶血效应。用补体结合试验既可以测知患者血清中补体的总量,也可以检测未知抗原或抗体的量。测定人血清补体总量的方法是以绵羊红血球的溶血为指示。当绵羊红血球与抗绵羊红血球结合后,加患者血清,观测溶血程度。去淤谭汀处染族彬挪匣编竟吕抹胯肢刹返孺某悄换猩釜蝎董块旺僳睹洼让抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法用于测定未知抗原/抗体时,采用两套系统,一套是待测的抗原抗体系统,称为检测系统,一套是包括绵羊红血球和抗绵羊红血球抗体的指示系统。待测系统中有无待测得抗原/抗体是利用指示系统中是否出现溶血来判断。反应的过程是首先加待测得抗原/抗体,反应一段时间后加入补体,在反应一段时间后加指示系统。有待测抗原抗体结合时,必然结合补体,不会出现溶血,没有待测物质时出现溶血。承熟穷龟守踢咖粒雌汉秋腕路毗钳蛮西缚稳宁夷码拨栖翻估苛胃坞搅桓费抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法