文档介绍：安徽农业科学,..,:—, 责任编辑李玮责任校对吴晓燕
以叶片为外植体建立三倍体毛白杨高效再生体系
于桂风,孙艳香·,常世民,曹存,李晓晖
.廊坊市农林科学院,河北廊坊;.廊坊师范学院遗传与育种研究所,河北廊坊
摘要目的建立三倍体毛白杨叶芽再生体系与探索抗生素对叶片再生不定芽的影响。方法以叶片为外植体,探索适合三倍体毛
白杨遗传转化的再生条件和抗生素对叶片再生不定芽的影响。结果结果表明,三倍体毛白杨最适合的不定芽分化培养基配方为
一././;在基因工程中,/的卡那霉素为选择性抗生素使用浓度,/的头孢霉素为抑茵性抗
生素使用浓度;再生的不定芽在./固体培养基中生根率可达%。结论该研究为毛白杨遗传转化中适宜的培养
基成分和抗生素浓度的选择提供科学依据。
关键词三倍体毛白杨;叶片;再生体系;抗生素
中图分类号. 文献标识码文章编号———
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三倍体毛白杨是近年来我国北方大力推广的速生丰产.. 分化培养基。培养基含蔗糖.% ,琼脂
林和工业用材林优良树种之一,其具有适应性广、抗病虫害、.%,根据已有经验和所查阅文献,该试验设计种分化
前期速生、轮伐期短、材质优良、树干洁白高大和树形通直美培养基处理,分别为①././⋯;
观等特点,其培育受到重视,种植面积逐年扩大,并获得了重②./././ ;⑨
要的经济效益。随着其推广年限的增长和种植面积的增大, ./././ ;④
病、虫危害也相应增加,种植范围也受到了盐渍化土壤的限././. ;⑤
制,因此,对现有品种进行改良,提高其抗病虫害、抗逆能力././。每瓶个外植体,设个
是一项重要的工作。通过基因工程手段进行品种改良是众重复,后调查叶片再生芽数量。
多改良方法中周期较短、见效较快的方法。而在基因转化过.. 卡那霉素和头孢霉素临界浓度的确立。取无菌苗叶
程中,建立取材便捷、再生高效的转化体系是成功进行转基片,切成~×~的方块,选取大小基本一致的外
因研究的重要基础。在毛白杨组织培养常用的叶柄、茎段和植体分别放在含有、、、、和/卡那霉素的分
叶片等外植体中,当属叶片最易取材。由于在转基因过程中化培养基中,天调查不定芽再生数目和生长状态;另一
卡那霉素为常用的选择性抗生素,头孢霉素为常用的抑菌性组试验取切好的外植体分别放在含有、、、、和
抗生素,因此,笔者以叶片为外植体探索适合三倍体毛白杨/头孢霉素的分化培养基中,调查不定芽再生数
遗传转化的再生条件,并研究这种抗生素对叶片再生不定目和生长状态。通过试验结果确立在遗传转化试验中抗生
芽的影响,以便确立遗传转化时适宜的抗生素使用浓度。素的使用浓度。
材料与方法.. 生根培养基和培养条件。生根培养基为
. 材料三倍体毛白杨无性系叶片,采自廊坊市农./;培养室温度~℃,光照强度为,
林科学院林场。/光周期。
. 方法.. 统计。不定芽诱导率%长出不定芽的外植体
.. 外植体的处理。于月上旬晴朗天气采集叶片,用数/接种外植体数×;增殖系数为每接种外植体上生长
%洗衣粉水洗净表面污物后,自来水冲洗过夜备用。将材的不定芽数,计算每处理的平均值。
料置于超净工作台上,%酒精浸