文档介绍：目的基因扩增方案和萝卜过氧化物rsprx1的扩增
实验目的
学会自行设计PCR反应体系和条件。
为萝卜过氧化物基因扩增提供依据。
学****并掌握PCR扩增技术的原理和基本操作。
实验原理
具体方案
配制PCR反应体系
10*缓冲液
总反应体积20微升
上游引物
下游引物
25mmol/L Mgcl2
模板DNA
TaqDNA聚合酶
重蒸去离子水
,用手指轻弹离心管底部,混匀溶液,在台式离心机中离心2s以集中溶液于管低。
PCR反应过程及条件
预变性
94摄氏度
5min
变性
94摄氏度
30s
30个循环
复性
54摄氏度
30s
延伸
72摄氏度
30s
最后一次延伸
72摄氏度
10min
保存
4摄氏度
根据情况定
实验步骤
打开PCR仪,使盖加热到一定温度,变成热盖。
按目的基因扩增方案进行操作。PCR仪运行了一个周期才能离开。
实验结果
分析:
根据提供的上下游引物查得该基因为萝卜过氧化氢酶基因,全长346个碱基对,gatc
83个g;81个c;82个a;100个t;。
,,自己提取的浓度过高,为了和其他同学一样,。根据实验:萝卜过氧化物酶rsprx1的扩增,,。
根据公司提供的引物和Tm,上游引物Tm=,下游引物Tm=,退火温度=Tm-5摄氏度。所以退火温度约为54摄氏度。
延伸时间,1Kb以内的需延伸1min,但该基因为346Kb,所以30s应该可以。
循环次数根据模板DNA浓度定,30个循环已足够。
使用热盖以免加温过程中液体蒸发影响反应体积。
10*缓冲液