文档介绍：纳米银胶标记的DNA电化学传感器制备及应用
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STRONG【摘要】/STRONG目的:研究一种新型的纳米银胶标记DNA电化学传感器的制备及应用。方法:通过将纳米银胶标记于人工合成的5'端-巯基修饰的寡聚核苷酸片段上,制成银胶DNA电化学探针。利用阳极溶出伏安法检测标记于DNA末端的Ag+,实现对特定序列DNA的测定。结果:经过实验条件的优化,×10-9~×10-7mol/L范围内呈良好的线性关系,×10-10mol/L。结论:该DNA电化学传感器响应快速、灵敏度高、稳定性好,适合于生物分析。
STRONG【关键词】/STRONG纳米银胶;电化学DNA传感器;杂交检测;阳极溶出法
生物样品中特定DNA序列的测定在生物医学领域具有重要意义[1],其结果可用于对遗传性和传染性疾病进行鉴别和检测。在众多的杂交检测方法中,放射性同位素标记法存在着放射性污染等弊端,而非放射性标记法如荧光、化学发光和生物素标记方法的检测仪器昂贵,难以实现自动化,且标记过程繁琐复杂[2]。DNA电化学传感器因具有简便快速、不破坏测试样品、不受溶液颜色影响等优点,已逐渐成为分子生物学研究中直接进行DNA序列检测的方法之一[3,4]。银胶是一种纳米材料,银胶粒子粒径小,比表面积大,表面反应活性高,从而具有良好的催化活性[5,6]。本研究将纳米银胶标记于人工合成的5'端-巯基修饰的寡聚核苷酸片段上,制成了高灵敏度、高选择性DNA电化学传感器,实现了对特定序列DNA的检测。
STRONG1材料和方法/STRONG
(上海辰华仪器有限公司生产),原子力显微镜(NanoscopeⅢa,DigitaoInstruments,),紫外-可见分光光度计(Varian,美国)。
人工合成的24个碱基的寡聚核苷酸片段(上海生工生物工程公司提供):
探针序列:5'-HS-(CH2)6-GAGCGGCGCAACATTTCAGGTCGA-3'
(SH-ssDNA)
互补靶序列:5'-GCTC-3'(ssDNA)
非互补序列:5'-GAGCGGCGCAACATTTCAGGTCGA-3'(ncDNA)
硝酸银、吡咯溶液(分析纯,上海化学试剂公司生产),硼氢化钠(分析纯,Fluka公司生产),(pH=)为缓冲溶液。制备银溶胶用去离子水(Millipore18M
Ω),其余用水均采用二次蒸馏水。
,最后用去离子水(Millipore18MΩ)荡洗几次。银溶胶的制备方法参见文献[5],×10-3mol/LNaBH4溶液置于冰浴中,在剧烈搅拌下,×103mol/LAgNO3溶液,继续搅拌1/2h,制得的溶胶呈黄色透明状,在4℃下可稳定保存约1个月。用原子力显微镜对银溶胶粒子的形状和大小进行了表征,结果显示银溶胶粒子呈球状,均匀地分布在溶胶中,其纳米银粒子的尺寸在8~15nm之间。
-ssDNA溶解在新制备的银胶溶液中,SH-ssDN