文档介绍：总糖和还原糖的测定——斐林氏法
作者:未知来源:生物秀时间:2006-8-30
总糖和还原糖测定方法较多,如3,5—二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽***比色法、斐林氏法等。这里只介绍斐林氏法。
 
一、目的
学****掌握生产实践中常用的快速定糖方法。
二、原理 
还原糖在碱性溶液中能将Ag+,Hg+,Cu2+,)3-等金属离子还原,而糖本身则氧化成各种羟酸,利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。本实验采用斐林试剂热滴定法,氧化剂是斐林试剂,它是由甲乙两种溶液组成,甲液中含有硫酸铜、次***蓝;乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁***化钾(黄血盐)。当甲乙两液混合时,硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀,由于溶液中存在酒石酸钾钠,它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。
酒石酸络铜(Ⅱ)钾钠盐在与还原糖共热时,二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。
此氧化亚铜与试剂中亚铁***化钾反应生成可溶性的亚铁***酸络铜(Ⅰ)钾盐。
Cu2O + )6 + 3 H2O →)6 + 2 KOH + 2 H2O
            亚铁***化钾                      亚铁***酸络铜(Ⅰ)钾盐
斐林试剂中二价铜的还原力比次***蓝强,因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原,只有当二价铜被还原完毕后,才能使次***蓝(甲烯蓝)还原为无色,测定中以此作为滴定终点。
在测定时先做一对照管(不加样品),用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次***蓝的量,即测定对照管消耗的标准葡萄糖量(A)。再做样品管,样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜,剩余的量再用标准葡萄糖来滴定,即样品消耗的标准葡萄糖量(B)。将(A)减去(B)就可求得样品中还原糖量。
三、器材及试剂:
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①山芋粉                                                               ②广范试纸pH1~12。
③吸管5毫升(×4),10毫升(×2)             ④容量瓶100毫升(×3)
⑤烧杯150毫升(×1),100毫升(×1)       ⑥三角烧瓶250毫升(×6)
⑦滴定管25毫升(×1)                                     ⑧双孔橡皮塞
⑨电炉300W(×1)                                           ⑩天平。
①斐林氏甲液:15克硫酸铜、***蓝溶于1升蒸馏水中。
②斐林氏乙液:50克酒石酸钾钠、54克氢氧化钠、4克亚铁***化钾溶于1升蒸馏水中。
③%标准葡萄糖溶液:,加入少量蒸馏水溶解