文档介绍：细胞原代和 传代培养
目录
细胞培养基本概念
细胞培养基本要求
细胞培养基本技术
细胞培养定义
定义:
模拟机体内生理条件,将细胞从机体中取出,在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。
优点:
:同时、大量、均一性、重复性;
: 各种物理、化学、生物等因素可调控;
:倒置、荧光、电子、激光共焦显微镜、流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记;
: 不同物种、不同年龄、不同组织、正常或异常(肿瘤);
缺点:
人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同;
当细胞被置于体外培养后,生活在缺乏动态平衡的环境中,时间久了,必然发生变化。
细胞培养的基本概念
传代:
细胞在培养器皿中生长一定时间后,被分开接种到新的培养器皿中。
原代培养
取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。
接触抑制(Contact inhibition)
细胞相互接触时,将停止增长;
细胞停留在细胞周期的G0期;
转化的细胞却可以继续生长导致细胞重叠堆积生长。
体外培养的细胞增殖能力不是无限的,传代次数有一定的界限,称为“ Hayflick极限”。
传代次数与物种寿命有关:小鼠寿命3年,传代12次;龟寿命200年,传代140次。
传代次数与个体年龄成反比:人胚胎,40-60代; 幼年,20-40代;成年,10-30代;早老病儿童,2-10代。
细胞传代次数(Passage Number)
原代培养 
(primary culture)从动物机体取出的进行培养的细胞群。生长缓慢,繁殖一定的代数后(一般10代以内)停止生长。
克隆
(clone)亦称无性繁殖系或无性系。对细胞来说,克隆是指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。
细胞系
(cell line)从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞,在培养条件下可无限繁殖
细胞株
(cell strain)从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群,能够繁殖50代左右,在培养过程中其特征始终保持。
原代培养与细胞系
原代培养细胞的生命归宿
原代培养期
传代期
衰退期
The American Type Culture Collection ()
The European Collection of Animal Cell Culture ()
National Institute of Health (NIH), USA
National Cancer Institute (NCI), USA
细胞系资源