文档介绍：1 液相色谱基础知识
液相色谱名词术语
Mobile phase:流动相,在色谱柱中存在着相对运动的两相,一相为固定相,一相为流动相。流动相是指在色谱过程中载带样品(组分)向前移动的那一相。
Stationary phase:固定相,柱色谱或平板色谱中既起分离作用又不移动的那一相。
Gradient elution: 梯度洗脱,一个分析周期中,按一定程序不断改变流动相的浓度配比, 使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。
Detection wavelength:检测波长,
retention time:保留时间,被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间
Peak:峰
Peak Base:峰基线,经流动相冲洗,柱与流动相达到平衡后,检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴
Peak Height:峰高,色谱峰顶点至峰底的距离。
Peak Width:峰宽,色谱峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点间的距离
Peak Width at Half Height:半峰高宽
Peak Area:峰面积
Tailing Peak: 后沿较前沿平缓的不对称峰
Leading Peak:前沿较后沿平缓的不对称峰
Ghost Peak: 假峰,并非由试样所产生的峰
Baseline Drift:基线漂移
Baseline Noise:基线噪音
Band Broadening:组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象.
流动相
流动相类型
正相液相色谱流动相:一般正相色谱固定相极性大于流动相极性,采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相);流动相为相对非极性的疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷),常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等),极性小的组分先出柱。
反相液相色谱流动相:一般用非极性固定相(如C18、C8);流动相为水或缓冲液,常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物,极性大的组分先出柱(现在大部分液相用的是反相色谱法)。
流动相注意事项
pH值的选择
~(2~8),太高的pH值会使硅胶溶解,太低的pH值会使键合的烷基脱落。
滤膜的使用
对于盐类等试剂,或者没有色谱纯的试剂,可以使用分析纯的,。盐类试剂最好现配现用。
使用滤膜时应注意:有机膜能滤水系,水系膜不能滤有机。如果流动相是有机溶剂的比例,那么就应该用有机膜过滤(但是如果是梯度进流动相的话,盐溶液可先单独用水膜过滤)
水膜:
纤维素微孔滤膜,易溶于丙酮等中等极性有机溶剂,不易燃烧,可用于空气测定之用,亦可用于乙醇或水液体过滤。
纤维素膜:
a) 醋酸纤维素膜:可过滤低分子量的醇类、水溶液、酒类、油类。
b) 硝酸纤维素膜:适用于水溶液、空气、油类、酒类过滤。不耐酸碱,溶于有机溶剂。可进行热压灭菌。
c) 醋酸纤维与硝酸纤维素混合酯膜:性质类硝酸纤维素膜。但可适用于PH值3~10范围,10%~20%的乙醇,50%的甘油,30%~50%的丙二醇等,而2%聚山梨酯80对膜有显著影响。
微孔滤膜使用前,应进行清洗处理,用蒸馏水浸泡洗净后装于滤器内,有机溶剂的过滤则用乙醇浸泡清洗。色谱样品或试剂的过滤,若是水系的,蒸馏水洗净浸泡后,再蒸馏水预过滤,若有机系过滤,最好先将本品在纯甲苯和95%以上的乙醇中分别浸泡过夜,再纯甲苯和纯乙醇预过滤,彻底洗净膜后使用。

微孔滤膜正反:
a) 各向同性,不分正反面,对额定孔径以上固体微粒能起到绝对截留的作用。
b) 有正反面,亮光强的为反面,亮光弱的为正面,膜内孔径从正面到反面逐渐递减。使用时应将正面对着待滤液,即待滤液从亮光弱的一面流入,滤净液从亮光强的一面流出,欲截留微粒相当于经历了孔径从大到小多层滤膜的阻截而不易堵塞,可显著延长使用寿命。使用时应在膜处理前认好正反面,(光线从侧面照膜可以比较出),作上记号,入水后正面将难以分辨。
有机膜尼龙(聚酰胺)微孔滤膜
材料为脂肪族尼龙,有良好的亲水性,耐适当浓度的酸碱,不仅适用于含有酸碱性的水溶液,亦适用于含有机溶剂,例醇类、烃类、醚类、酯类、酮类,苯和苯的同系物,二甲基甲酰胺,二甲基亚砜等等,是适用范围最广的微滤膜之一。有机膜入水后显著变脆,入有机溶剂强度的减少则轻些。有机能滤水系,水系不能滤有机。
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