文档介绍：核酸凝胶电泳用于分离、鉴定和纯化DNA或RN***段优点:便于分离;便于检测;,利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。(1)~,DNA分子在高于其等电点的溶液中,核酸分***基几乎不解离,磷酸全部解离,核酸分子带负电,在电泳时向正极移动。劫提涯四制够领件志竖顿聋匡蒂赌哮竿忌销泣郧饮峭猜霖普之靛舵弧恭纲第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测(2)分子筛效应在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子本身的大小和构型。分子量较小的DNA分子,比分子量较大的DNA分子迁移率要快;cDNA>IDNA>ocDNA盛棋伺晾灶捅涎缓鄙赴逐瞅帝歇魄刮芋苇衣硬弱娜秤脯瘦宋煽殿这迁橇涎第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测(3)DNA分子的大小在凝胶中,DN***段迁移距离(迁移率)与碱基对的对数值成反比,因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较,便可测出未知片段的大小。歉货伟棱泞痞睫县苦瘤玩艺网矾雾歉逮扬壕拘过众围眉浴缩则像垮讹止珍第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测根据标准DNA相对迁移距离推测待测定的DN***段的大小谰绽喧建鉴随细相刘硅碘椒庚烈队披狈匪诞曼寿驱筏伯瘴咖北清帚达捻躁第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测如何提高核酸电泳的分辨率?蟹一腺亚羹挺斜馅阳围谈缮忿恃认皖叙逐防薛囱暗抛蹿奔嘻敬痴壬船跃箱第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测(4)凝胶电泳的分辨力与凝胶的类型和密度相关一、~50Kb之间(<20kb);可区分相差loobp的DN***段,常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。***凝胶用于分离5-500bp的片段;垂直装置进行电泳效果好、分辨率极高,相差1bp的DN***断就能分开,能容纳相对大量的DNA用于核苷酸多态性的分析泄剧镣盈烟宵祸也岭推若脂拇搪磋嘻豫峰楔忆碰羡疙系青叙替索桓旱卧波第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测不同浓度琼脂糖的凝胶分离范围琼脂糖浓度(%,W/V)DNA分子的有效分离范围(kb)-----2二、凝胶的密度孙哺态久裕毅沉葬牢紊征拱竞林休筑毅彰斡耐继葬誉轩街虾羡甸酋邮遂藕第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测可以通过提高琼脂糖的浓度减小凝胶孔径来提高电泳分辨率。或者改用聚丙烯酰***凝胶。还可以降低跑电泳的电压,增大跑电泳的时间等。如何提高核酸电泳的分辨率?:(1)DNA分子的大小:双链线状DNA分子迁移的速率与其碱基对数值近似成反比。样品分子越大,在通过胶孔时的摩擦阻滞力越大,泳动速度越慢。蚁棋漓栏范因东薯溉邱箱茹暑寄疮鄙响逛授飘箔烟托喊蛊脸拣刊羽操茫丹第四章核酸电泳与检测第四章核酸电泳与检测