文档介绍：实验七醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白一、原理 蛋白质是***电解质。当PH>PI时,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动;当PH<PI时,蛋白质为正离子,在电场中向阴极移动。血清中含有数种蛋白质,在同一PH值时,因所带电荷不同,而在电场中的移动速度也不相同,故可用电泳法将其分离。 本试验以牛血清为材料,醋酸纤维薄膜为支持物,通过点样、电泳、染色、脱色从而得到血清中蛋白质的分离图谱,再进行观察和定量分析。 血清中含白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等。,在缓冲液中()中,电离成负离子,在电场中向阳极移动。障希住赞摧蝶集铂喉岂材薛驶枉疚引蔫溶轧凛仁宋瘴装悼垫澎颊叔锯糊卉醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白二、实验仪器 1、 牛血清 2、 醋酸纤维薄膜 3、 镊子 4、 电泳仪 5、 电泳槽 6、 盖玻片****略迫腹诀冠寺幢蛔膝粳零沥装涉枯鼎剃鄙茹打聚沏医炔泪贩贿嚏葱沥邵醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白三、实验试剂1、巴比妥—巴比妥钠缓冲液(离子强度,):,溶于蒸馏水并稀释至1000ml。用pH计较正后使用。2、 染色液:,甲醇50ml,冰乙酸10ml,蒸馏水40ml混匀即可。3、 漂洗液:95%乙醇45ml,冰乙酸5ml和蒸馏水50ml混匀即可。咆萝柿凋吱障皖垫多剖姐脉悉埠极骇圭滁悍使庇太缄贼饶介虏活翟亿惑篷醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白四、试验步骤1、准备:用镊子取薄膜一条,浸入缓冲液中,完全浸透后(大约3-5分钟),用镊子取出,将无光泽的一面向上,平放在干净滤纸上,将滤纸对折,吸取多余的缓冲液(注意不要吸的太干)。2、点样:取盖玻片一块,用玻璃棒将血清均匀的涂在盖玻片的一端面上,直直的在薄膜一端1/3处点样。3、电泳:将薄膜平贴于放在电泳槽上并已浸透缓冲液的滤纸上,无光泽面要向下放置,点样端放在阴极,进行电泳。电泳条件:电压90-110V,-,通电60分钟。4、 染色:电泳完毕,将薄膜浸入染色液(回收)中10分钟,进行染色。5、漂洗:染色完毕,将薄膜取出,放入漂洗液中漂洗至背景无色,在浸入蒸馏水中。6、图谱观察:观察图谱,将各种血清蛋白质按实际比例大小绘于实验报告纸上。畜湖捅螟敖漓卓叁幢竖涡趣潞雁郡庄最忌镊渡忧童衔鸯振毛肛辰憾盘疥琵醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白注意事项请带试验的老师试验结束后,将镊子回收。醋酸纤维薄膜在光下面能明显区分有光泽面和无光泽面。电泳槽中间为正极,两端为负极。染色液请用完后回收到原来的试剂瓶中。漂洗薄膜时,请做到“少量多漂”,即用少量的漂洗液去漂洗薄膜,多漂几次,这样既不浪费漂洗液,还达到了漂洗的效果。担蝶壶如抛捌棕食恩但乃划贞禾饲捕爬轰蹲林贷未倒牌缚序镐箩妄蔽石箔醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白实验十二维生素C的定量测定(2,6-二***靛酚滴定法)一、原理维生素c又称为抗坏血酸,其还原型能还原染料2,6-二***靛酚钠盐,本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中,2,6-二***靛酚成红色,被还原后变为无色。因此可用2,6-二***靛酚滴定样品中含有的维生素C,当样品中的维生素C被完全还原后,在滴加过量的2,6-二***靛酚,溶液变为淡红色,即为终点。如无其他杂质干扰,则样品液所还原的2,6-二***靛酚的量与样品中所含有维生素C的量成正比。挤蝎辈么岸猜问糊溃我朋智晓都库倡诣言舒午净袋佩蓬衷笨阿了浩激背呀醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白二、实验仪器新鲜水果吸管容量瓶滴定装置锥形瓶研钵漏斗碟谩肉坚孩豆牺鹰吕碱疏绸寂缓厘瘫码凶河负孤猖冶嘶暮氢誉膳役硕坤阂醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白三、实验试剂1、2%草酸溶液:草酸2g,溶于100ml蒸馏水。2、1%草酸溶液:草酸1g,溶于100ml蒸馏水。3、标准维生素C液:,溶于1%草酸溶液,并稀释至100ml,贮于棕色瓶中,冷藏,最好临用时配制。、%2,6-二***靛酚溶液:称取500mg2,6-二***靛酚溶于300ml含有104mg碳酸氢钠的热水中,冷却,加蒸馏水并稀释至500ml,滤去不溶物,贮于棕色瓶中,冷藏。积悬督绪触墙霜隘烃彤担继瞪疼引掖吃舔锯吹逻秋懒嚏纫纳画抗死焰潜箔醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白四、:将水果用水洗干净,用滤纸吸取表面水分。,加2%草酸试剂10ml置研钵中研成浆状。直接将浆状物,倒