文档介绍：医学免疫学实验指导病原生物与免疫学教研室实验一免疫系统组织和细胞形态学一、 实验目的观察小鼠胸腺、脾脏等免疫器官及免疫细胞二、 实验内容机体免疫系统由免疫器官、免疫细胞、免疫分子组成。该系统具有识别和排除抗原性异物、维持机体内环境稳定和生理平衡的功能,是执行体液免疫和细胞免疫的物质基础。本次实验主要观察免疫器官大体解剖学、免疫细胞的形态学特征。小鼠是啮齿目中体形较小的动物,淋巴系统很发达,包括胸腺、脾脏、淋巴管、外周淋巴结及肠道派氏集合淋巴结。本实验在带教老师指导下,解剖小鼠,观察胸腺、脾脏等免疫器官,并制血涂片,观察小鼠免疫细胞。(-)小鼠免疫器官解剖学观察【材料】1动物:昆明种小白鼠。试剂:3%来苏尔水,瑞特氏染液。器材:眼科钱,眼科剪,玻片。【方法】1小鼠脱臼处死,投入盛有3%来苏尔水的缸内,浸泡5分钟。取出小鼠,仰卧位置于试验台上,使动物腹部朝上。2以银子提起耻骨处皮肤,用剪刀沿正屮线直剪开至下颌部,然后钝性分离皮肤,再把皮肤向四肢剪开。注意观察腹壁,用剪刀沿正中线自阴部至膈肌为止剪开,观察腹腔液量及性状,观察脾脏。切开膈肌,剪断胸骨,翻起胸骨,观察胸腺、心脏及肺脏,胸腺位于小鼠胸腔心脏前上方,内有许多大淋巴细胞(即前胸腺细胞)及特定的上皮网状细胞(分泌胸腺激素)。解剖结束,深埋动物。(二)免疫细胞的形态观察【材料】1动物:昆明种小白鼠。试剂:3%来苏尔水,瑞特氏染液,,20%盐酸甲醇。器材:眼科银,眼科剪,玻片。【方法】1准备洁净玻片两张,一张用于推片,另一张用于固定标本。剪断小鼠尾巴取血或小鼠眼球取血,迅速在玻片上涂血膜制备血涂片,自然干燥。瑞氏染色(1)染色:甲醇固定标本2分钟(亦可省略),滴加瑞氏染液数滴覆盖血膜,染色1分钟,,用洗耳球吹打,使之与染液混匀,静置染色8〜10分钟,弃去染料,水洗。(2)脱色:用20%盐酸甲醇脱色,肉眼观察玻片呈粉红色为宜,显微镜下观察结果。细胞特征T细胞:T细胞是由胸腺内的淋巴干细胞分化而成的,是淋巴细胞中数量最多、功能最复杂的一类细胞,占外周血液淋巴细胞总数的75%〜80%。T细胞体积较小,胞质少,核呈圆形,常在一侧有小凹陷,染色质呈块状,较致密,故着色较深。多数T细胞寿命较长,可存活数月至数年或更长。在抗原刺激下,T细胞经过多次分裂增殖,形成效应性T细胞。效应性T细胞的存活期短,具有杀伤靶细胞的能力,但必须与靶细胞结合才能产生免疫效应。B细胞:B细胞由骨髄中的淋巴干细胞分化而成,占血中淋巴细胞总数的10%〜15%,数量较少。细胞体积比T淋巴细胞略大。B细胞的结构,在光镜下与T细胞难以区别。E细胞生存期一般较短,可存活数周或数月,也有寿命长达数年的。当B细胞受到抗原刺激后,增殖分化为大量浆细胞。浆细胞可合成和分泌抗体(免疫球蛋白),抗体在血液中循环。通过抗体与抗原结合,可屮和毒素,抑制细菌或靶细胞的代谢,溶解靶细胞,从而清除相应抗原并促进巨噬细胞吞噬抗原。NK细胞:自然杀伤细胞,由骨髓屮淋巴干细胞分化而来,占血屮淋巴细胞总数的2%〜5%,在人体内分布广泛,以外周血和脾、淋巴结中NK细胞活性最高。在中空器官的管壁固有层和一些实质性器官的间质中,均有NK细胞存在。在骨髓中NK细胞活性较低。NK细胞是大淋巴细胞,平均直径为12〜15gm,胞质较多,在胞质内有许多大小不等的嗜天青颗粒,故乂称大颗粒淋巴细胞,核呈卵圆形。NK细胞不需抗原激活,更不需抗体的协助,它可直接杀伤靶细胞,例如杀伤被病毒感染的细胞和肿瘤细胞,NK细胞的这种抗感染和抗肿瘤的杀伤作用是广谱的。DC:树突状细胞,是一类形状不规则的非单核吞噬系统细胞,特点是胞浆有许多长突起呈触须状,使整个细胞的形态像一个蜘蛛。树突状细胞分散于全身的上皮组织和实质性器官,其细胞数量不超过局部细胞总数的1%;也可迁移到血液和淋巴,%。树突状细胞的吞噬能力较弱,但细胞表面积大,且有丰富的MHC1I类分子,所以捕获抗原和递呈抗原的能力很强。单核巨噬细胞:单核细胞发生于骨髓的多能干细胞,循环于血液中,穿透血管内皮进入组织内,转变为巨噬细胞。单核吞噬细胞系统在体内分布广,细胞数量多,主要分布于疏松结缔组织、肝、脾、淋巴结、骨髓、脑、肺以及腹膜等处,并依其所在组织的不同而有不同的名称。单核细胞一般为圆形,直径约10〜20pm;巨噬细胞大小不等,直径约10〜30pm或更大,常有伪足,呈多形性。单核巨噬细胞有肾形或马蹄形的核,胞浆中富含溶酶体及其他各种细胞器。中性粒细胞:占白细胞总数的50%〜70%,是白细胞屮数量最多的一种细胞。细胞呈球形,直径10〜12pm,核染色质呈团块状。核的形态多样,有的呈胎肠状,称杆状核;有的呈分叶状,叶间有细丝相连,称分叶核。