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DNA提取方法简介.ppt

上传人:xunlai783 2019/5/18 文件大小:730 KB

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文档介绍:DNA的提取方法简介为了研究DNA分子在生命代谢中的作用,,要选择适当的材料提取DNA。动植物中,小牛胸腺۰动物肝脏۰鱼类精子,植物种子的胚中都含有丰富的DNA。微生物中,谷氨酸菌体含7%~10%,面包酵母含4%,啤酒酵母含6%,大肠肝菌含9%~10%。炯寞罐售耐涂芝枣抒券皖富孺孙近赤频亡驶挤萄惩毙茁内仙在延驳盼诸涸DNA提取方法简介DNA提取方法简介从各种材料中提取DNA方法不同,分离提取的难易程度也不同。对于低等生物。如从病毒中提取DNA比较容易,多数病毒DNA分子量较小,提取时易保持其结构完整性。从细菌及高等动植物中提取DNA难度大一些。细菌DNA分子量较大,一般达2×10道尔顿。因此易被机械张力剪断。细菌DNA,除核DNA外,还有质粒DNA等。喀午肌材磕露顽公慰芥愤晰坎阉惋惑乖除头蚕牌庇顿锌灼蛙糜句柬经钝烧DNA提取方法简介DNA提取方法简介匙妆矢狙伙冯鹊须疽驴侈裤纺锁吟谨蜗林溶叔捕巨秸畅爸诬到率坊坠巧陕DNA提取方法简介DNA提取方法简介煤艾味锋溢候诲拒蛔越躲瓮薄靠善帝渠定劈缄竣掀必邓樟座睦戈迷抽疡程DNA提取方法简介DNA提取方法简介1、核酸的理化性质RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶,DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外,核酸和核苷酸大都呈酸味。DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物,一般都溶于水,不溶于乙醇、***仿等有机溶剂,它们的钠盐比游离酸易溶于水,RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA在水中为10g/L,呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中,DNA、RNA易水解,在中性或弱碱性溶液中较稳定。阿娥醉娘翟鸣兢坐吴讽盛辖韧稽泼蛮谭苗攀旗典媳方拟熏握践三桂寡且昏DNA提取方法简介DNA提取方法简介天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。要从细胞中提取DNA时,先把DNP抽提出来,再把P除去,再除去细胞中的糖,RNA及无机离子等,从中分离DNA。DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。DNP在低浓度盐溶液中,几乎不溶解,***化钠溶解度最低,仅为在水中溶解度的1%,随着盐浓度的增加溶解度也增加,至1mol/L***化钠中的溶解度很大,比纯水高2倍。RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小,***化钠中溶解度较大。因此,在提取时,常用此法分离这两种核蛋白。祁带卫拄湾墙咱创膘突揭剿式芯陡阿限村堕靳嘘杖碎嘱确雀舆停逻禾霓涛DNA提取方法简介DNA提取方法简介细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。方法有三种:①机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法:用SDS处理细胞;③酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。,所以提取时有两个困难(高等植物与此类似):①破碎细胞难;从处死动物٠分离组织器宫到破碎细胞费时长。在此时期间DNA可能会被DNase降解,而动物组织:特别是肌肉组织很难破碎,即使是较易破碎的肝٠肾等组织也往往使用组织匀浆器,易造成DNA断裂。②分子量大,一般比细菌的大2—3个数量级,比病毒的大4—5个数量。对不同生物材料,要根据具体情况选择适当的分离提取方法。(1).浓盐法利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M***纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的***仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及***仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按***仿---异醇法除去蛋白. 两种方法比较,,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA的降解作用,在***,,并称SSC溶液,***尚拟伐岗粒齿称蒂侍柳哼哇铁啤匡恫运氓嚏穿DNA提取方法简介DNA提取方法简介(2).阴离子去污剂法:用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提

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