文档介绍：羂Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;mercialuse莂薇凝聚***法交叉配血试验操作规程薅肁[目的]蒈保证交叉配血试验准确,确保临床输血安全。芈[适用范围]蚃XXX医院输血科薁[职责]腿具有专业技术的工作人员主要负责XXX医院输血标本的交叉配血试验,但只对该单份标本负责。荿[相关文件]肆试剂采购、保存和使用管理程序芄设备采购、使用管理程序罿消毒与清洁管理程序膆标本采集、运输、保存和报废管理程序膄紧急用血管理程序蚄[相关记录]蚀仪器设备的采购、使用和维护记录膈仪器的温度记录薆恒温水温箱的换水和消毒记录肃消毒液的配置记录蒀清洁消毒记录艿试剂采购、使用记录蚅标本交接和报废记录蒂交叉配血记录膀紧急用血记录肇[实验原理]肇红细胞表面带有大量的负电荷,以避免产生自发性聚集,当红细胞悬浮在电解质中时,阳离子会被红细胞的负电荷所吸引,此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕而形成Zeta电位,Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。羂凝聚***技术首先利用低离子溶液(LIM)降低介质的离子强度,减少红细胞周围的阳离子云,以促进红细胞与血清(血浆)中的抗体结合。其次加入的凝聚***(Polybrene)溶液是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂,溶解后能产生很多正电荷,可以中和红细胞表面带有的负电荷,使红细胞的Zeta电位降低,缩短红细胞之间的距离,使红细胞产生非特异性的凝集。最后加入的悬浮液(Resuspending)具有中和凝聚***(Polybrene)阳离子的作用,使正常的红细胞非特异性凝集散开,试验结果为阴性;但如果红细胞被相应的抗体致敏,则会被凝聚***凝集而不会散开,试验结果为阳性。羁[仪器器械]膈玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。膅[试剂]莁生理盐水、凝聚***试剂、Anti-humanIgG血清,均为有合格证件的正品。蚁[试剂保存和稳定性]腿凝聚***试剂须保存在2-25℃(其中阴、阳对照血清应储存在2~8℃)。在适当储存条件下有效期24个月。芄抗人IgG血清低温冰箱保存。复溶后放2—4℃冰箱保存。肅凝聚***试剂蒁①低离子介质溶液(LIM):含葡萄糖,乙二***四醋酸-2钠及稳定剂。羇②凝聚***溶液(Polybrene):含凝聚***,***化钠及稳定剂。蚆③复悬液(Resuspending):含柠檬酸钠,葡萄糖及稳定剂。蒄④阳性对照血清:含抗D血清、***化钠及稳定剂。膂⑤阴性对照血清:含AB血浆、***化钠及稳定剂,不含红细胞血型抗体。肈[标本收集与处理]螄1、受检者血清:采集受检者静脉血2~3ml,经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。袃2、2~5%的受检者红细胞:采集受检者静脉血或末梢血,先用生理盐水洗涤红细胞3次,再根据下表进行红细胞悬液的配制。蚈悬液浓度(%)聿压积红细胞(滴)***盐水(滴)莃2荿1袇40(2ml)芅5螂1腿16()羈3、以上标本有效期为三天;若受血者抽取标本后,输用过血液或血液制品,且输用时间超过12小时的,必须重新采集标本。莄4、标本出现中度以上溶血者,为不合格标本,不能用于检测。膁[实验方法与步骤]衿1、分别制备受血者和献血者3~5%的红细胞悬液(取2支使管分别标注为受血者管和献血者管,再分别加入2ml生理盐水,在受血者管加入1滴受血者红细胞,在献血者管加入1滴献血者红细胞,混匀后备用)。羀2、取4支使管,分别标注主侧、次侧、阴性对照和阳性对照:螆主侧管:先加入2滴受血者血清(血浆),再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液;蚁次侧管:先加入2滴献血者血清(血浆),再加入1滴受血者2~5%红细胞悬液;薀阴性对照管:先加入2滴阴性对照血清,再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液;阳性对照管:先加入2滴阳性对照血清,再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液。螇3、,轻轻混匀,于室温下静置1分钟。袄4、再各加入2滴Polybrene溶液,轻轻混匀,于室温下静置15秒。芄5、用交叉配血专用离心机3400r/min(相当于1000g离心力)离心10秒,然后倒掉上清液(不要沥干),。莀6、轻轻摇动试管,目测红细胞有无凝集,如无凝集,则必须重做。重做后仍然没有凝集现象出现,可能试剂失效。袈7、最后各加入2滴Resuspending溶液,轻轻摇动试管并同时目测凝集是否散开,再进一步倒在玻片上用显微镜观察凝集是否散开。如果在60秒内凝集散开,表明是由Polybrene引起的非特异性凝集,配血结果相合;如果凝集不散开,则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应,配血结果不相合。***如果想进一步检测Anti-K抗体,则必须继续做辅助性的抗球蛋白试验,步骤如下:螃8、再滴入1滴Resuspend