文档介绍：中南民族大学硕士学位论文
摘要
血竭总黄酮是血竭中提取的药用有效成分。血竭具有活血化瘀、止痛、止血、生肌
敛疮等功效,主要用于外伤出血、溃疡不敛、跌打损伤、瘀滞作痛等症,有“活血之圣
药”的美誉,为名贵中药材之一;其主要成分是黄酮类化合物,此类物质具有明显的抗
真菌、抗细菌、抑制血小板聚集、抗血栓、增强纤溶等活性。因此开展血竭总黄酮的研
究有助于更好地开发利用血竭这一宝贵资源。本论文从国产血竭全粉中提取分离血竭总
黄酮有效成分,并对纯化的总黄酮与蛋白质的相互作用以及它的抗菌性能进行了研究,
主要工作如下:
1 血竭总黄酮的提取分离
采用 D101 大孔吸附树脂对血竭总黄酮进行纯化,以紫外分光光度法测定总黄酮含
量,高效液相色谱法分析总黄酮中龙血素 A、龙血素 B 的含量,以静态和动态两种操作
方式,对血竭总黄酮在大孔吸附树脂上的吸附和解吸行为进行了数理分析,获得适宜的
吸附和解吸条件。在静态实验中,比较了三种大孔吸附树脂,对筛选出的 D101 树脂,
着重考察了样品液浓度、温度、无机盐等因素对树脂吸附容量的影响,以 Langmiur 方
程和 Freundlich 公式拟合了不同温度下的吸附等温线。在动态实验中,分别考察了动
态吸附和动态解吸的条件,拟合了吸附穿透曲线,并探讨了解吸动力学过程,所有参数
对于有效的分离是至关重要的。研究结果表明:(1)在三种大孔吸附树脂中,D101 型
树脂对血竭总黄酮的吸附效果最好;(2)D101 树脂对血竭总黄酮的吸附等温线能用
Langmiur 方程较好的拟合,外加 KCl 或 NaCl 能提高 D101 树脂对血竭总黄酮的吸附容量;
(3)在 pH 、流速为 ·min-1、上柱原液总黄酮浓度 mg·mL-1 的条件下,
D101 树脂对血竭总黄酮的动态吸附容量为 mg·g-1;(4)用 70%乙醇作为血竭总黄
酮洗脱剂,在 、流速 mL·min-1 条件下,用量为 4 倍柱床体积(4BV)时,洗
脱剂可洗脱下被 D101 树脂吸附的血竭总黄酮,解吸率达 %;(5)血竭总黄酮在 D101
树脂上的解吸动力学可以用一级扩散方程较好拟合。
同时也研究了聚酰胺树脂对血竭总黄酮的纯化效果,考察了进样方法、洗脱剂浓度、
洗脱流速、树脂使用次数等因素,并实验了梯度洗脱方式。研究结果表明,聚酰胺树脂
吸附血竭总黄酮不能采取碱溶解试样上柱的方法,实验中将血竭样品用有机溶剂溶解
后,与聚酰胺混合,然后将溶剂蒸发完全进行吸附,树脂的吸附量为 1g·g-1 树脂,用
50%乙醇作为血竭总黄酮洗脱剂,在 mL·min-1 流速下,7BV 洗脱剂可洗脱被聚酰胺树
脂吸附的龙血素 A 和龙血素 B,解吸率均达 91%以上,而血竭总黄酮的解吸率仅为 %,
并且聚酰胺树脂使用三次后即需再生。所以,聚酰胺树脂纯化血竭总黄酮逊于 D101 树
脂,但是,它从总黄酮中分离龙血素 A 和龙血素 B 却有好的效果。
I
血竭总黄酮的提取分离及其作用
采用分离总斑点数(N)及斑点之间的分离参数(α)的评价方法对几种硅胶 GF254 薄
层层析的展开剂进行了比较,发现在选用的四种薄层色谱流动相中,石油醚-甲苯(8﹕
1)对血竭总黄酮的分离效果最好,层析板上分离出 8 个斑点,对总黄酮的薄层分离具有
一定的意义。
2 血竭总黄酮的作用
应用分子荧光法研究并发现了牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、牛血
红蛋白(HB)与血竭全粉的有效成分总黄酮能相互作用,又基于荧光猝灭现象,将血
竭总黄酮作为一个整组分考虑,得到血竭总黄酮与上述蛋白质的平均表观结合常数,从
热力学参数推得药物分子与蛋白质分子间作用力类型等分子作用信息。实验结果表明:
(1)血竭总黄酮在与 BSA、HSA、HB 结合的过程中,能不同程度地猝灭各蛋白质的荧光
强度,并随着血竭总黄酮浓度的增加,各蛋白质荧光呈规律性猝灭,此过程仅需 5min
达到平衡;(2)通过 Ster-Volmer 方程和 Lineweaver-Burk 双倒数方程的拟合比较,认为血
竭总黄酮对 BSA、HSA、HB 的猝灭作用主要不是因为分子的扩散和碰撞所引起的动态
猝灭,而是由于分子之间的结合,形成了具有一定结构的超分子化合物所引起的静态猝
灭;(3)在所实验的酸度(, pH , pH )下,血竭总黄酮与 BSA、HSA 的
平均静态猝灭结合常数均随 pH 的升高而增加;HB 与血竭总黄酮的平均静态猝灭结合
常数几乎不受酸度的影响;(4)由热