文档介绍：生物芯片概念生物芯片是将大量生物分子按预先设计的排列固定于一种载体表面,利用生物分子的特异性亲和反应,来分析各种生物分子存在的量的一种技术。生物芯片的分类根据生物芯片的结构特点根据用途不同:二、生物芯片的研究概况生物芯片的发展最初级的生物芯片DNA芯片1991寡核苷酸芯片1994测序芯片1995cDNA芯片其他生物芯片生物芯片技术研究存在的问题重复性(稳定性)提高灵敏度增强标准化实现设备及软件完善操作过程简化三、生物芯片技术的基础知识生物芯片技术工作的总流程生物芯片的制备生物芯片技术主要包括四个基本技术环节:芯片制备、样品制备、生物分子反应、信号的检测与分析生物芯片的制备步骤有哪些?分别有什么目的?基片处理、点样、固定、封闭第二章核酸芯片一、核酸芯片简介概念:核酸芯片是指采用一定的技术将许多特定的DNA序列排列固定于固相支持物表面,然后与标记的样品进行杂交,通过检测杂交信号来实现对生物样品的快速、并行和高效的检测和分析。二、核酸芯片的载体载体概念:用于连接、吸附或包埋各种生物分子使其以水不溶性状态行使功能的固相材料统称为载体。如何选择载体?载体表面必须具有可进行化学反应的活性基团,以便于生物分子进行偶联。使单位载体上结合的生物分子达到最佳容量载体应当是惰性的和有足够的稳定性载体具有良好的生物兼容性,以利于制作不同种类的芯片。载体类型:玻片、硅片、硝酸纤维素膜、尼龙膜、塑料等三、寡核苷酸芯片技术oligonucleotidemicroarrayoligochip概念:寡核苷酸芯片是把寡核苷酸固定在玻片上,与荧光标记的待检序列在一定条件下杂交,经洗涤后扫描获得检测信息。制作技术与原理原位合成原理(略)合成后微点样原理利用手工或自动点样装置将预先合成和纯化的寡核苷酸点在经特殊处理的载体上即可。包括接触式与非接触式两种,主要用于中低密度芯片制备点样方式及点样针思考题:比较三种针的优缺点?使用裂缝针时,如果看到玻片上某些点没有点上,分析可能的原因?点印完以后,含有斑点的区域必须加以行列标志,为什么?如何保存?点样的后期处理目的:为了使探针能与载体表面牢固结合,同时,避免在杂交过程中非特异性的吸附对实验结果(特别是背景)造成影响。小结:寡核苷酸芯片的基本概念寡核苷酸芯片的制备原理光引导原位合成点样针及点样过程四、cDNA微阵列芯片cDNA是与mRNA互补的DNA分子,-。cDNA微阵列芯片是由固定于基质材料上的cDNA片段组成的微阵列,待测样品标记后与芯片上的探针分子杂交,通过荧光强度的检测对杂交结果进行分析。主要内容:cDNA文库的构建提高cDNA文库构建的效率cDNA基因文库构建的步骤细胞总RNA的提取和mRNA的分离第一条cDNA合成双链cDNA合成双链cDNA克隆进质粒或噬菌体载体并导入宿主中繁殖cDNA文库构建效率cDNA文库构建的效率低的表现?造成这种低效率的主要原因?如何提高cDNA文库构建的效率?表达谱基因芯片:用来检测样本中RNA/mRNA,即基因表达(转录水平)的研究芯片。将待测样品(处理组)与对照样品的mRNA以两种不同的荧光分子进行标记,然后同时与芯片的探针进行杂交,通过分析两种样品与探针杂交的荧光强度的比值,来检测基因表达水平的变化。表达谱研究的方式:基因表达丰度的绝对检测基因表达发生变化的相对检测第三章蛋白芯片二、