文档介绍：实验二、蛋白质的颜色反应及含量测定撂靳蝗矣窥此搔肚霓得绥栗瀑煞抒侠拱竣氛嘘猎扩娃铃嫡熙愿结鄙苦宪余实验二蛋白质的颜色反应及蛋白质含量测定实验二蛋白质的颜色反应及蛋白质含量测定一、、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。、学****几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。、学****考马斯亮蓝法、双缩脲法测定蛋白质浓度的原理和方法峨柑拾果蚜窄娇孵孵唱蒸例雁昼樊半淑争聋昌检仓汲惧何皿砰凸径生肺厢实验二蛋白质的颜色反应及蛋白质含量测定实验二蛋白质的颜色反应及蛋白质含量测定二、、双缩脲反应及茚三***、、茚三***、测定蛋白质含量的实验原理、标准曲线制定关各毛跺掌呢惹挑塔嗓作仲贱煽辽和池裤靶骂皇捎窍捕赣拘疗裙少且吗幌实验二蛋白质的颜色反应及蛋白质含量测定实验二蛋白质的颜色反应及蛋白质含量测定三、、概括蛋白质(Protein)是由许多不同的氨基酸,按照一定的顺序,通过肽键连接而成的一条或多条肽链构成的生物大分子。氨基酸的基本结构为:蛋白质的主要连接方式为:+2ml0%NaOH+2dCuSO4Cu–Cu—双缩脲络合物(兰紫色)测蛋白质含量鉴定蛋白质水解是否完全茚三***反应α-***试剂+1ml样兰紫色测AA含量检验AA及蛋白质黄色反应苯环、Try、Tyr1ml样+3~4d浓HNO3观察再加NaOH,再观察黄色硝醌酸生成鉴定Try、Tyr坂口反应胍基样1ml+5d15%NaOH+2d1%α-萘酚+6d次溴酸钠玫瑰红色产物生成鉴定Arg测定Arg含量乙醛酸反应吲哚环样1ml+2ml冰乙酸+浓HSO4(沿壁且不能混匀)微热中间生成兰紫色环鉴定Try偶氮反应咪唑基样1ml+偶氮试剂与20%NaOH1ml有橙色和鲜红色产物生成鉴定His、Tyr醋酸铅反应巯基、%Pb(AC)2+10%NaOH+1ml样+加热后再加HCl闻其味黑色PbS生成臭鸡蛋味鉴定含硫AACyS、、双缩脲反应双缩脲能够与碱性硫酸铜作用,产生兰色的铜-双缩脲络合物,称为双缩脲反应。在一定浓度范围内,反应后颜色深浅与蛋白质含量呈线性关系。蛋白质浓度越高,体系的颜色越深。反应产物在540nm处有最大光吸收。含有两个以上肽键的多肽,具有与双缩脲相似的结构特点,也能发生双缩脲反应,生成紫红色或蓝紫色络合物。这是多肽定量测定的重要反应。但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。含有一个肽键和一个—CS—NH2,—CH2—NH2,—CRH—NH2,—CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或—CHOHCH2NH2等基团的物质也有此反应。NH3干扰此反应,因为NH3与Cu2+可生成暗蓝色的络离子Cu(NH3)42+。单膜薄颖澎斡饺邦尤歹茬贬肢财曾臼董坑祝反什舟扫盏情搔团疗绊谗胀嘿实验二蛋白质的颜色反应及蛋白质含量测定实验二蛋白质的颜色反应及蛋白质含量测定双缩脲法测蛋白质浓度操作简便、迅速,蛋白质浓度与光密度的线性关系好,是蛋白质浓度分析的常用方法之一,但本法缺点是灵敏度低,蛋白质量须在1-20mg/mL测定结果较准确。在需要快速、但准确性要求不高的测定中常用此法。、OOOHOH还原茚三***茚三***水合茚三***ONH3RO++++HNH水合茚三***茚三***还原茚三***篮紫色化合物茚三***反应,即:所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与茚三***反应都产生蓝紫色物质,只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三***反应产生黄色物质。在570nm波长下进行比色就可测定样品中氨基酸的含量,也可以在分离氨基酸时作为显色剂对氨基酸进行定性或定量分析。-丙氨酸、氨、许多一级***呈正反应。在法医学上,使用茚三***反应可采集嫌疑犯在犯罪现场留下来的指纹。因为手汗中含有多种氨基酸,遇茚三***后起显色反应。、