实验七 鸡基因组的PCR-RFLP分析.ppt.ppt

文档介绍：实验七鸡基因组的PCR-RFLP分析
动物遗传学实验
一、实验方法
1、鸡基因组DNA的提取
2、目的基因的PCR扩增
3、内切酶消化PCR产物
4、琼脂糖凝胶电泳(检测基因型)
鸡DNA的获取
1、鸡翅下静脉采集全血;2%EDTA抗凝;
2、DNA提取:
裂解细胞核(红细胞+白细胞)
酚-***仿去除蛋白质
酶解RNA
获取DNA
PCR扩增
1、引物设计(Genbank);

2、聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)
PCR反应体系
DNA模板
dNTP
Taq DNA聚合酶
引物
Mg2+
缓冲液
PCR反应程序
预变性 94℃ 3~5min
35循环:
变性 94 ℃ 30s~1min
退火 50~65 ℃ 30~60s
延伸 72 ℃ 1~2min
后延伸 72 ℃ 5~10min
PCR产物电泳检测结果
PCR产物+缓冲液+内切酶
5‘-TCATGA-3’
3’-AGTACT-5’
内切酶消化PCR产物
A
B
电泳图谱
AA
BB AB
电泳检测基因(1)
电泳检测基因(2)