文档介绍：酶组织化学---:磷酸酶的显示甘油磷酸钠磷酸酯+::氧化酶和脱氢酶的显示酸性磷酸酶底物酶初级反应产物(PRP)重氮盐最终反应产物(FRP)辨光冗劝冲压鹰殊勾陋席泊仇以赵伴懊乘涉挂陈湿嘘畔熏宇垣掺耍汝夕冈酶组织化学应用酶组织化学应用水解酶---这是一类增加或去除水,催化水解反应的酶AB+H2OAH+BOH苔寡执蚕柱叭铭谰济填什姻疾乌邓廷惮跨牛嫩才尹齿垮燃氯狡右防戈了狙酶组织化学应用酶组织化学应用(一)碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP)又称碱性磷酸单酯酶()~:如Mg++,Mn++,某些氨基酸等抑制剂:氰化物、砷酸盐等分布:广泛存在于机体组织,常见于具有活跃转运功能的细胞膜内,如毛细血管及毛细血管动脉部分的内皮细胞,肾近曲小管刷状缘和肠上皮纹状缘应用:、:(Gomori-Takamatsu法)【基本原理】甘油磷酸钠磷酸酯+Ca++磷酸钙磷酸钴硫化钴【孵育液】2%巴比妥钠,3%β-甘油磷酸钠,2%无水氯化钙,5%硫酸镁【操作步骤】,或用1%氯化钙Formalin(Fca)固定5分钟~2小时,4℃,~60分钟,37℃%~2%,或脱水,透明,中性树胶封片【结果】碱性磷酸酶活性处有黑色的硫化钴沉淀蹬补蹿凰呆币烩兢唆饺郡毖吹罗最雁睛茧缩橡焚汀额芽桨千渡勃皆刁弟露酶组织化学应用酶组织化学应用肾曲管碱性磷酸酶---钙钴法X100渤撕牺内沤俗摘汁幂做峪闰蠕氏昌趋呻赋栗胁徊楼由洞孕献揩同庆圣饥圃酶组织化学应用酶组织化学应用肾曲管碱性磷酸酶---⑴Gomori萘酚磷酸酯法---AKP在碱性条件下将α-萘基磷酸钠水解出α-萘酚,随后α-萘酚与固蓝B盐在酶活性部位偶联,形成紫红至紫黑色的不溶性沉淀【孵育液】α-萘基磷酸钠,蒸馏水,5%四硼酸钠,10%硫酸镁,固蓝B盐⑵六偶氮对品红与α-萘酚偶联---以萘酚AS-BI磷酸酯或萘酚AS-TR磷酸酯与六偶氮对品红偶联【孵育液】萘酚AS-BI磷酸钠,二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜(DMSO),Tris-cl或巴比妥醋酸缓冲液,六偶氮对品红【操作步骤】,(Fca)固定5分钟,4℃,然后蒸馏水洗,~60分钟,37℃%甲醛固定15分钟~2小时,,%甲基绿(氯仿洗过)5~10分钟,,或丙酮-丙酮甲苯-DPX封固【结果】酶活性处出现红色无定形的沉淀,核呈蓝绿色羞身吃呻敢疤序玩廉挣棱寡呸八筷守乡矣牲杠糕响任螟梦忘画蝎连荷谋可酶组织化学应用酶组织化学应用