文档介绍：液相色谱法测定猪和牛脂肪中孕***残留量醋酸美仑孕***、醋酸***地孕***和醋酸甲地孕***为合成的孕激素类药物,有明显的孕激素和抗雄激素作用,可抑制排卵。孕激素对垂体促性腺激素的释放有一定的抑制作用,动物实验表明有死胎率增加和致畸作用,副作用有:(1)恶心、头晕、倦怠;(2)突破性出血;(3)孕期服用,会增加女性后代的男性化作用。孕激素类药物能增强体内物质沉积和改善生产性能,可以很快产生显著和直接的经济效益,因此,对生产者有很大的吸引力。畜牧业中使用孕激素类药物(非治疗用途)已有很长的历史,但人类长期食用含有激素的肉制食品,即使含量甚微,亦会明显影响机体的激素平衡,而且有致癌危险,对幼儿造成发育异常等危害。因此,开发一种能检测孕***残留量的方法是十分必要的。本文采用高效液相色谱法对牛和猪脂肪样品中的孕*** 试剂醋酸美仑孕***、醋酸***地孕***和醋酸甲地孕***标准品,乙***,甲醇,乙酸乙酯,其他试剂为分析纯。水由净化系统制得。(1)标准储备液:1000μg/ml,***、醋酸***地孕***和醋酸甲地孕***标准品于50ml容量瓶中,用甲醇定容。于4℃保存,可使用一年。(2)混合中间溶液I:100μg/ml,***、醋酸***地孕***和醋酸甲地孕***标准储备液于100ml容量瓶中,用甲醇定容。于4℃保存,可使用一年。(3)混合中间溶液II:,,用甲醇定容。于4℃保存,可使用半年。(4)混合标准工作液:分别吸取10、20、40、80、100μl混合中间溶液II添加到980、970、950、910、890μl的乙***-水(65:35)中,%盐酸溶液,混匀,、、、/ml混合标准工作液,供液相色谱测定,当日使用。 仪器 LC7000液相色谱系统,LC7011泵体,LC7020紫外-可见检测器,Hanon-Clarity色谱软件。氮吹仪;海能全自动固相萃取装置;低温离心机;固相萃取柱。2 试样的制备把大约5g的猪或牛脂肪组织切成小块,然后放入底部塞有玻璃棉的漏斗中,放入150ml的烧杯中,将烧杯置于微波炉内。根据所熬制脂肪量,使用最大功率,加热30~60s,如果脂肪没有融化,可在间隔30~60s以后重复加热30~60s,直到有液体脂肪流出,通过漏斗滴入烧杯中。把熬制好的脂肪油放入样品瓶中,密封,并做上标记。 样品的保存把熬制好的脂肪油样品置于-18℃中, ±,置于50ml具塞离心管中,加入5ml乙***,于60℃水浴中保温3min以使固体脂肪溶化,涡旋振摇1min,在-5℃下离心7min(离心力1160g),吸取上清液至15ml带塞聚丙烯离心管,再在沉淀物中加入5ml乙***重复提取一次,合并上清液。在合并的乙***提取液中加入2×2ml正己烷,涡旋振摇1min,于-5℃中离心5min(离心力1160g),弃去正己烷层。乙***提取液于60℃中用氮吹仪吹干,残渣待皂化。 皂化在残渣()中依次加入4ml正己烷、