文档介绍：压力超负荷大鼠心室肌细胞Bax、Bcl
作者:罗承锋,黄衍寿,刘月婵,冼绍祥,洪永敦,刘煜德
【关键词】心室肌细胞
摘要:【目的】观察腹主动脉缩窄造成的压力超负荷大鼠模型左心室肌细胞B细胞淋巴瘤/白血病基因蛋白(Bcl2蛋白)及其家族成员Bax蛋白表达的序列变化。【方法】压力超负荷大鼠各时间点(造模后1、4、7、10、21、30、40d)Bax、Bcl2蛋白的表达用流式细胞仪进行胞内抗原定量检测。【结果】在腹主动脉缩窄之后第1天,大鼠左心室肌细胞Bax蛋白的表达率较高(6375%),Bcl2蛋白的表达率则较低(3145%),Bax/Bcl2较高(202);在以后的观察点中,Bax蛋白的表达率变化不大,波动于50%~60%之间,而Bcl2蛋白的表达则于第7天升至最高值(7175%),尔后开始下降,第30天时其表达率最低(228%);Bax/Bcl2于第4天时下降,第7天时降至最低,随后开始逐渐上升,第30天达到峰值(24),到第40天时又下降。【结论】腹主动脉缩窄造成的压力超负荷大鼠模型左心室肌细胞凋亡发生的高峰可能在造模后的第30天。
关键词:细胞凋亡;心力衰竭,充血性/病因学;疾病模型,动物;大鼠
Bing在1994年就提出细胞凋亡是慢性压力超负荷导致心力衰竭的机制的假说[1]。越来越多的证据表明,压力超负荷时存在着心肌细胞凋亡。B细胞淋巴瘤/白血病基因蛋白(Bcl2蛋白)及其家族成员Bax蛋白在细胞凋亡的调控过程中起着重要的作用。笔者对压力超负荷大鼠心室肌细胞Bax、Bcl2蛋白的表达规律进行了研究。
1 材料与方法
11 动物及分组
普通级SD大鼠24只,雌性,体重180~220g,购自广州中医药大学实验动物中心,随机分为8组,即大鼠造模后第1、4、7、10、14、21、30、40d 8个时间点,每组各3只。
12 主要器材与试剂
牙用不锈钢丝(上海牙科医械厂,批号:K41701);分析天平(LIBROR AEU210,Shimadzu);抽滤器(NALGENE,pany);离心机(LD52A,北京医用离心机厂);光学显微镜(BH2,Olympus);流式细胞仪(EPICS ALTRA,Beckman Coulter)。Ficoll(Sigma,华美生物工程公司分装,批号:38H0588);多聚甲醛(广州化学试剂厂,批号:99010136);小鼠抗大鼠Bax Ab4(6A7)(Neomarkers,批号:714P010);小鼠抗大鼠Bcl2α Ab4(10C4)(Neomarkers,批号:598P111);藻红蛋白(RPE)标记的羊抗小鼠F(ab′)2IgG(Serotec,批号:280901);封闭用羊血清(北京中山生物技术有限公司,批号:ZLI9021);RPE标记的羊F(ab′)2IgG(Southern Biotechnology Associate Inc,批号:J366W490B)。
13 心衰模型的复制
以腹主动脉缩窄法复制大鼠左心室压力超负荷模型[2]。给大鼠腹腔注射100g・L-1水合氯醛,剂量35mL・kg-1,麻醉后,暴露腹主动脉,并于双侧肾动脉上方钝性分离腹主动脉,用4号缝合线将腹主动脉和与腹主动脉平行放置的外径约06~09mm的牙用不锈钢丝一