尼古丁对人外周血内皮干细胞数量和活性的影响.pdf

文档介绍：中国药理学与毒理学杂志 2005年 6月; 19(3):199-204
ChinJPharmacolToxicol 2005 Jun; 19(3):199-204 · 199·
尼古丁对人外周血内皮干细胞数量和活性的影响
朱军慧,王兴祥,陈君柱,许轶洲,孙坚,尚云鹏,郭晓纲
(浙江大学医学院附属第一医院心内科,浙江杭州 310003)
摘要:目的观察尼古丁影响出生后的血管新生是大量的研究表明,尼古丁或吸烟可能通过影响
否与其影响外周血内皮干细胞(EPC)的数量和活性内皮细胞从而影响血管新生[1~3]。出生后的血管新
有关。方法采用密度梯度离心法从外周血获取单生过程除由原先存在的血管内皮以出芽、分裂增殖
个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板, 等方式形成毛细血管丛(即血管形成,angiogenesis)
培养 7d后,收集贴壁细胞,加入不同浓度尼古丁外,还存在内皮干细胞(endothelialprogenitorcell,
(分别为 10-12,10-10,10-8,10-6及 10-4mol·L-1) EPC)参与的血管生成[4~6]。因而作者考虑尼古丁
培养一定的时间(12,18,24,32及 48h)。激光共是否可能通过影响 EPC的数量和功能从而影响出
聚焦显微镜鉴定 FITCUEAⅠ和 DiIacLDL双染色生后的血管新生。
阳性细胞被认为是正在分化的 EPC,流式细胞仪检本研究采用体外培养健康成人外周血 EPC,观
测其表面标志进一步鉴定 EPC,倒置荧光显微镜下察了不同浓度尼古丁对外周血 EPC数量和功能的
计数。然后分别采用 MTT比色法、改良的 Boyden小影响及其时效关系,旨在进一步明确尼古丁对生物
室、体外血管生成试剂盒和粘附能力检测实验,观察体的效应。
EPC的增殖能力、迁移能力、体外血管生成能力和粘
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附能力。结果尼古丁在浓度为10 ~10 mol· 1 材料与方法
L-1范围内显著增加外周血 EPC数量,改善外周血
EPC的粘附能力、迁移能力、增殖能力和体外血管生 材料与试剂
成能力,并且 EPC数量随尼古丁浓度增加而增加, 人纤维连接蛋白(humanfibronectin)、体外血管
10-8mol·L-1浓度尼古丁 EPC影响最为显著(P< 生成试剂盒、血管内皮生长因子(vascularendothelial
,n=6)。另外,10-8mol·L-1尼古丁呈时间依 growthfactor,VEGF),购自 Chemicon公司;M199、
赖地增加外周血 EPC数量,改善外周血 EPC功能。 FITC标记荆豆凝集素Ⅰ(FITCUEAⅠ)、尼古丁购
而尼古丁在浓度>10-6mol·L-1却减少外周血 EPC 自 Sigma公司;DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白
数量,损害外周血 EPC功能。结论尼古丁可增加(acLDLDiI)购自 MolecularProbe公司;改良的 Boyden
EPC数量并改善其功能,然而高浓度尼古丁或许对小室购自江苏海门麒麟医用仪器厂;胎牛血清购自
EPC具有毒性。杭州四季青生物工程材料研究所;二苯基四氮唑溴
关键词:内皮;干细胞;尼古丁;血管生成盐(MTT)购自华美生物工程