文档介绍：长春理工大学硕士学位论文
姓名:刘通申请学位级别:硕士
专业:无机化学指导教师:宋博
20080401
好性,化学合成人洳一颍寺≈琳婧吮泶镌靥錺校摘要超氧化物歧化酶虺芐谏锾迥谄鹱欧浅重要的作用,它是一类广泛存在于生物体的各个组织中的金属酶。酵母是一种甲基营养型酵母。本文构建表达入甋的重组酵母工程菌株,在摇瓶水平探索不同外界条件对培养上清酶活性的影响,测试目的蛋白酶的稳定性。;铣嘟湍窯。经ㄑ粜宰;樱肎筛选高拷贝转化子,并用甲醇诱导表达。表达产物进行甈%检测。用ú舛ǖ白院浚酶慕牧诒饺臃ú舛康牡白酶活性,测定不同外界条件下培养液上清中的酶活性,测试粗酶液对化学试剂,相对分子量为左右,低糖基化,目的蛋白占外分泌蛋白总量的%,法测定目的蛋白最高表达量为/;钚圆舛ㄊ笛榻峁砻鳎罴烟跫屡养液上清的酶活性为/,粗酶对氯仿和乙醇稳定,对不稳定,粗酶对温度和都较稳定。最佳发酵条件初步确定为初始,维持甲醇浓度3醪饺范朔⒔偷牡淖罴烟跫痛置敢憾曰约粒露群蚿奈克隆表达稳定性巴斯德毕赤温度和的稳定性。和峁允荆泶锬康牡鞍字实ィ中嘌∈薄T诒铣嘟湍窯细胞内成功表达了具备酶活性的人定性。关键词人,毕赤酵母
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中英文缩写词表郾0纺旱缬氨苄青霉素碱基对二甲基亚砜过氧氢酶英文缩写中文全称十二烷基硫酸钠双氧水光密度磷酸盐缓冲液多克隆位点。Ⅳ匝甈
壹簋塞豪菟苣月且日作者签名:垂:耗滥阓垫&年氯と长春理工大学硕士学位论文原创性声明长春理工大学学位论文版权使用授权书本人郑重声明:所呈交的硕士学位论文,《人,在毕赤酵母中克隆表达的研究》是本人在指导教师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。本学位论文作者及指导教师完全了解“长春理工大学硕士、博士学位论文版权使用规定”,同意长春理工大学保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权长春理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,也可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。作者签名:指导导师签名:
第一章绪论活性氧与蛐环境污染等因素也可诱发机体产生自由基。自由基对正常生命活动的许多重要反应必不可少,它参与生物活性物质的合成,解毒反应,吞噬细胞和杀灭细菌的过程等。但是过量的自由基也可引起广泛的损伤效应,自由基通过传递和增谢中不断产生自由基,种类繁多,其中以活性氧最多。在生物体内,氧分子可以通过单电子接受反应,依次转变为.·,与·等中间产物。由于这些物质都是直接或间接地由分子氧转化而来,而且具有比分予氧更活泼的化学反应性,遂统称为活性氧,’其中。·和·为氧自由基。生命离不开氧,人们时时刻刻在与氧打交道。人类为了适应氧化性环境,在演化过程中不仅利用氧的氧化作用进行物质代谢和能量代谢,而且还利用活性氧消灭入侵的微生物,同时不停地建立和完善对氧化性损伤的保护机制,尽管如此,人体对活性氧的防御系统还不完善,氧胁迫仍然危害人类健康,许多慢性损伤性疾病琢觥⑿难9懿⑼诵行圆”洹⒏髦盅字⒑退ダ都与氧化性损伤有关,甚至有时活性氧的损伤会造成或大或小的病理变化,从感冒到癌。年和发现超氧化物歧化酶为并研究了其生物学意义之后,揭示了氧效应的自由基机理。说明。·的形成是氧毒性的主要因素,提出了氧毒性的超氧自由基学说,极大地促进了对氧代谢深入系统的研究。氧在代谢过程中要产生活性氧,由于’·是被一个电子还原生成,而其它的活性氧是通过‘·产生的,所以’·是造成氧毒性的主要物质。超氧自由基被公认为是人体细胞的“杀手”,是引起衰老、肿瘤等严重疾病的罪魁祸首。年代中期,美国科学家就提出将氧的损伤效应归因于氧自由基的形成。以后的实验证明,不但在高氧条件下氧有毒性,即使在正常氧的环境中,亦存在氧的损伤效应。很多研究表明,由于·自由基可使细胞质和细胞核中的核酸链断裂,损害傻贾孪赴槐洌⒅琢觥⒀字ⅰ⑺ダ稀⒀R翰∫约靶摹肝、肺、皮肤等方面病变的产生稹Q踝杂苫伤鹕说鞍字剩墒沟鞍字实淖机体内自由基主要来源于细胞生化反应,此外,紫外线照射,电离辐射和殖,愈来愈多的自由基在细胞内的出现会损伤细胞,引发各种疾病‘¨。机体代
脂质过氧化,、酶失活、膜功能受损、干扰膜的运姆植技爸掷换增加,,攻击未饱和脂肪酸可引起在正常情况下活性氧不会对细胞构成危害,因为生物体内有一个防