SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳.ppt

文档介绍：SDS-聚丙烯酰***凝胶垂直板电泳分离蛋白质蛋白免疫印迹杂交(WesternBlot)是将蛋白样本通过聚丙烯酰***电泳按分子量大小分离,再转移到杂交膜(blot)上,然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。WB是进行蛋白质分析最流行和成熟的技术之一。原理聚丙烯酰***凝胶是由单体丙烯酰***(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰***(Bis)在加速剂N,N,N,N—四***乙二***(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶,以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰***凝胶电泳(PAGE)。30%丙烯酰***的配制1、称量Acrylamide290g,Bis10g,置于1L烧杯中2、向烧杯中加入约600ml的去离子水,充分搅拌溶解。3、加去离子水将溶液定容至1L,。℃保存。注意:丙烯酰***具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套、口罩等。聚丙烯酰***无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份。凝胶浓度(T)的选择与被分离物质分子量密切相关。 适用的凝胶浓度/(%) 蛋白质10KD 20-30 1O-40KD 15-201O-100KD 10-15 100KD 5-10 500KD 2-5分离胶的聚合(12%)%丙烯酰***-SDS %AP25ulTEMED5ul上层加异丙醇压胶,室温一小时积层胶的聚合(5%)%丙烯酰***-%