文档介绍：、、、纯化研究一个新的蛋白质首先要从它的基本性质作为突破口,然后根据它的基本性质进行分离纯化,最终用纯品对其进行分析鉴定。如果对蛋白质的基本性质尚未搞清楚,工作起来将会困难重重。因此,蛋白质研究技术主要是对蛋白质的基本性质进行的分析鉴定。研究蛋白质的结构、性质和功能,首先需要得到纯的蛋白质样品。(1)蛋白质来源:微生物细胞、动物细胞和植物细胞;(2)分离和纯化过程都必须0-4℃的低温下进行。蛋白质的分离、(1)生物组织的机械破碎。常用的方法有研磨法、超声波法、冻融法和酶解法等。(2)根据蛋白质的特性,选择不同的溶剂进行抽提。水溶性蛋白用中性缓冲溶液抽提;酸性蛋白用稀碱性溶液抽提;脂溶性蛋白用表面活性剂抽提等。(3)粗提:离心除去固体杂质后,可通过盐析、沉淀法、凝胶滤法、超过滤等处理,得到蛋白质粗制品。(4)精制:可用层析法、电泳法等进行精制。(5)成品加工:测定蛋白质的性质并干燥成成品。,而使它与其它小分子化合物,如无机盐、单糖、双糖、氨基酸、小肽以及水等分离。常用的半透膜是玻璃纸或称赛璐玢纸、火棉纸和其它合成材料。膜有玻璃纸或高分子合成材料,截止分子量一般为1万。(1)透析法(dialysis)。凝胶过滤所用的介质是由交联葡萄糖、琼脂糖或聚丙烯酰***形成的凝胶珠。凝胶珠的内部是多孔的网状结构。凝胶层析介质:Sephadex-葡聚糖凝胶G10-G200Sepharose-琼脂糖凝胶2B,4B,6BSephacryl-丙烯酰***葡聚糖凝胶S100,S200,S300,S400凝胶过滤层析(2)柱层析凝胶过滤原理当不同大小的蛋白质颗粒流经凝胶柱时,比凝胶网孔大的分子不能进入凝胶珠内的网状结构,而被排阻在凝胶珠外,随着溶剂在凝胶珠之间的空隙向下移动并最先流出柱外;比网孔小的分子能不同程度地自由出入凝胶珠的内外。大分子小分子凝胶颗粒凝胶排阻示意图解