文档介绍：安徽医科大学
硕士学位论文
重组人粒细胞集落刺激因子的克隆、表达、纯化和PEG单修饰以
及修饰前后的体内外生物学活性
姓名:张兵
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:宋礼华
20080501
缩略词中文全名英文缩写英文全名粒细胞集落刺激因子牛血清白蛋白二氨基联苯胺脱氧核糖核苷三磷酸二甲基亚砜乙二匪囊宜澳化乙锭谷氨酰胺辣根过氧化物酶硝酸纤维素膜光密度聚合酶链反应聚丙烯酰胺凝胶电泳十二烷基硫酸钠’,’.四甲基联苯胺琋’琋’.琋’一’.四甲基乙二胺氨苄青霉素●ⅡⅡ—
学位论文作者签名:╦.掌冢旱脑絢巴纩学位论文作者签名:纯要、日期:埘掺彳学位论文使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。、使用学位论文的规定。学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版,有权将学位论文用于非目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅,有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索,有权将学位论又的标题和摘要汇编出版。保密的学位论义在解密后适用本规定。导师签日
重组人粒细胞集落刺激因子的克隆、表达、纯化和バ奘我约靶奘吻昂蟮奶迥谕馍镅Щ钚中文摘要目的:构建、,。方法:酶切回收目的插入中构建成表达载体,转化大肠杆菌,挑取单菌落提取质粒进行鉴定。鉴定后的阳性克隆温度诱导表达,表达产物经甈兔庖哐Ъㄕ确后,纯化包涵体,进行蛋白的变性、复性,复性后蛋白再经离子交换和分子筛进行纯化,得到纯品瓹,薄层扫描仪扫描凝胶以检测纯度。用单修饰狢,=果:#琒な当达后所获得的融合蛋白分子量为,表达量约占菌体总蛋白的%,以不溶的包涵体形式存在。印迹表明目的蛋白具有人瓹的抗原性。纯化后产物甈缬竞缶荷枰巧璐慷任ィ瓹的单奘味茸罡撸琍—瓹达到%左右。经纯化后获得纯度大于%./奘魏/>∈筇内的作用时间延长,同时显著增强了瓹在小鼠体内血浆中白细胞的增殖。结论:,在大肠杆菌中获得表达,获得包涵体复性后的纯化蛋白。建立了瓽的生产工艺;纯化的璓单修饰并纯化得到纯度大于%的瓹。初步证明,经バ奘魏螅瓽的体外生物学活性下降,但在小鼠体内的作用时间延长,显著增强了狢在小鼠体内的活性。关键词:表达包涵体复性修饰生物学活性危康幕狢:/狪:,室温下进行修饰反应时,狢的为安徽医科大学硕士学位论文张兵年
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重组人粒细胞集落刺激因子的克隆、表达、纯化和バ奘我约靶奘吻昂蟮奶迥谕馍镅Щ钚引言:生物制药技术是发展最快高新技术之一。由于刈榧际跫捌浯蠊婺V备过程的出现和发展,应用刈榧际跎牡鞍住⒍嚯摹⒚浮⒓に亍⒁呙纭细胞生长因子及单克隆抗体等生物药品已广泛用于治疗癌症、艾滋病、冠心病、多发性硬化症、贫血、发育不良、糖尿病、心力衰竭、血友病、囊性纤维变性以及一些罕见的遗传疾病。重组人粒细胞集落刺激因子,狢翘匾熳饔糜诹O底嫦赴⒋俳其向成熟中性粒细胞增殖、分化的造血生长因子。,对治疗各种肿瘤放化疗、骨髓移植、骨髓型放射病及、’酆险鞯鹊贾碌牧O赴跎僬睿具有显著疗效,可以减少化疗后中性粒细胞减少性的发生率,降低医疗费用,改善病人的生活质量【。同时,瓹的应用不仅可以保证常规化疗如期足量进行,而且使病人能耐受提高剂量强度的化疗或剂量密集性化疗,还用于高剂量化疗联合自体造血干细胞移植的干细胞动员与移植后造血重建,得以保证甚至提高化疗的疗效【。人瓹由单个基因编码。。瓹基因转录后产生前提,在:中由于第瞿诤‘端有两个不同的剪切位点而产生两种不同的拼接方式,,可由多种细胞如单核细胞、成纤维细胞和内皮细胞等产生。它们在某种刺激下可产生一定量的瓹。。张兵年.
.,等电点为,有糖基化,对酸碱.⑷度,失活