文档介绍：上海师范大学
硕士学位论文
锌指蛋白Zfp191的DNA结合性质研究
姓名:王皓月
申请学位级别:硕士
专业:物理化学
指导教师:沈鹤柏
20080401
摘要论文题目学科专业学位申请人指导教师锌指蛋白的岷闲灾恃芯物理化学沈鹤柏作为真核生物中一类重要的转录因子,锌指蛋白通过结合特定的蛄校广泛地参与基因的表达调控、信号转导、细胞的生长以及分化和发育等生命过程。研究锌指蛋白的岷闲灾识杂谔窖捌涞骺氐南掠伟谢蚓哂兄匾R庖濉1韭文探讨了锌指蛋白的岷闲灾省锌指蛋白是近年来发现的小鼠型锌指蛋白。作为转录因子,已经被证明在小鼠的心脏、脑、肝、肾等组织中广泛表达,并且根据其分布推测其在软骨分化以及细胞的生长发育分化过程中具有重要的生理功能。更重要的是,基因敲除的小鼠所表现出的胚胎发育上的严重缺陷证明其在胚胎发育过程中的重要作用。但是锌指蛋白基因自瓯籔发现以来,其相关的实验研究主要集中于基因的结构鉴定、体内分布以及宏观的生理功能探索,而对于蛋白的性质及在转录调控中所担当的具体角色关注较少。因此,有必要关注的岷闲灾剩沂酒渫ü鹘谙掠位虮泶锢吹骺胤育的具体方式。本论文中,我们设计并构建了融合蛋白甖用来模拟的岷辖峁褂颉2⑶遥么判阅擅琢W忧缀头ā微阵列以及微孔显色法进一步研究了的岷辖峁褂蛴肫渌暮塑账嶂馗吹陌行蛄兄浣岷戏从Φ性质。这些性质包括岷闲蛄械奶匾煨浴⒔岷戏从Φ男院徒岷戏从Φ男离子依赖性。实验的结果显示,该融合蛋白能够特异地与酪氨酸羟化酶基因的第一个内含子奈⑽佬切蛄结合,并且亲和力随重复数的增加而加强;重复序列上有多个岷辖峁褂虻慕岷衔坏悖魑坏阒存在协同效应。此外,岷辖峁褂蛴隓的结合反应在理论上具有锌离子依赖性,在我们的工作中给出了实验证据。本论文的工作为进一步研究在发育阶段调控基因表达中所起的作用提供了线索。王皓月
关键词:锌指蛋白;岷系鞍祝籘L澹晃⑽佬切蛄校淮判阅擅琢子;⒄罅校晃⒖紫陨ǚ治论文类型:研究报告
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作者签名:王俦日导师签名::王储同日期:≥。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中做了明确的声明并表本人完全了解上海师范大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留送交论文的复印件,允许论文被查阅和借阅;学校可以公布论文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其它手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此示了谢意。规定。上海师范大学硕士学位论文
第一章文献综述引言年,人类基因草图的绘制完毕;年,国际公共领域人类基因组合作计划和美国公司公布人类基因组图谱“基本完成辏馈⒂ⅰ⑷铡法、德、中龉鲅芯恐行牧:闲既死嗷蜃樾蛄型纪瓿伞1臼兰统酰人类通过步步努力拥有了打开生命科学之门的金钥匙。在准确率达到.%的人类基因组序列“完成图’’中,不仅包含了基因序列,而且涵盖了那些辅助调节基因活性的涡蛄小H欢虳序列信息本身而言,并不能提供特定基因功能的确定信息。这就需要人们将在掌握了基因组静态的碱基序列后,转而对基因组进行动态的生物学功能的研究。一个以破译、解读以及开发基因组功能信息为主要研究内容的时代已经开始,即进入了后基因组时代。这个时代的开始预示着人们在这些巨量的序列信息基础上,从分子层面探索人类自身生命过程和疾病的奥秘都成为可能。后基因组时代更加注重从整体水平研究基因及其产物在不同时间、空间与条件下结构与功能关系及活动规律。特别是真核生物的基因结构复杂,功能分化,基因的开关及活性通常受到多种调节元件精确调节。目前,真核生物的基因调控已经成为分子生物学中重要的研究方向之一。转录水平的调控通常会广泛地影响基因表达,是真核细胞生长、扩增以及整体分化、发育等生命过程的分子基础。例如,在果蝇的发育过程中,母体基因的表达产物具有转录激活或转录抑制的活性,调控着合子基因的表达,这是果蝇早期发育的主要调控模式【。这种现象在哺乳动物中也极为常见。对转录调控的研究通常可以从两方面入手,其一,可以以鉴定基因的调控元件为切入点,通过寻找结合在调控序列上的转录因子或转录因子复合物来探明该基因转录调控的机制;其二是掌握了或者从结构预测出某种蛋白因子具有转录调控的功能,通过寻找其靶向调节序列,进而找到其调节的下游基因,从而阐明该蛋白因子在调节基因表达方面的功能和地位。目前,有很多功能并不明确的转录因子新基因需要用上述的第二种方法来确定它们的功能以及在生理过程中的地位。小鼠锌指蛋白基因怯蒔等人于年为克隆和鉴定参与软骨分化相关的基因,通过差减杂交策略从软骨细胞系上